[發明專利]一種同時檢測喹諾酮類抗生素殘留量的方法在審
| 申請號： | 201810743074.2 | 申請日： | 2018-07-09 |
| 公開（公告）號： | CN108459166A | 公開（公告）日： | 2018-08-28 |
| 發明（設計）人： | 李周敏;許丹科;李鐘卉;姜金斗 | 申請（專利權）人： | 南京祥中生物科技有限公司;黑龍江省農墾乳品檢測中心 |
| 主分類號： | G01N33/68 | 分類號： | G01N33/68 |
| 代理公司： | 南京蘇高專利商標事務所(普通合伙) 32204 | 代理人： | 楊曉莉;肖明芳 |
| 地址： | 210002 江蘇省南京*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 喹諾酮類 微孔板 檢測 喹諾酮類抗生素 喹諾酮類藥物 殘留量 生物芯片陣列 芯片分析軟件 藥物殘留分析 單克隆抗體 氟喹諾酮類 微陣列形式 芯片掃描儀 殘留檢測 反應原理 快速掃描 納米材料 人工抗原 實驗操作 顯色結果 重要意義 標準品 競爭法 可視化 靈敏度 顯色 用銀 制備 成像 抗生素 圖像 參考 應用 研究 | ||
1.一種同時檢測喹諾酮類抗生素殘留量的方法，其特征在于，包括以下步驟：
(1)制備可視化蛋白芯片：將喹諾酮類單克隆抗體在芯片載體上進行點樣操作，恒溫孵育固定，加入封閉劑繼續恒溫孵育，然后洗滌拍干；
(2)特異性結合反應：取步驟(1)制備所得可視化蛋白芯片，向孔板內加入喹諾酮類不同濃度梯度的混合標準品或待檢測樣品，每個標準品或樣品重復至少兩個孔；再加入納米銀標記的喹諾酮類混合抗原，貼上蓋膜板后恒溫振蕩孵育，孵育完成后洗滌拍干；
(3)顯色反應：向步驟(2)反應后的孔板內加入納米銀增強顯色液，恒溫振蕩孵育，然后用超純水洗滌拍干；
(4)處理分析：利用可視化生物芯片掃描儀對步驟(3)處理后的蛋白芯片進行掃描，并利用芯片分析軟件進行結果處理分析。
2.根據權利要求1所述的同時檢測喹諾酮類抗生素殘留量的方法，其特征在于，所述喹諾酮類抗生素選自氧氟沙星、洛美沙星、培氟沙星、依諾沙星、諾氟沙星、恩諾沙星、環丙沙星、萘啶酸和氟甲喹中的一種或多種。
3.根據權利要求1所述的同時檢測喹諾酮類抗生素殘留量的方法，其特征在于，步驟(1)中，所述芯片載體采用微孔板、玻片、膜或者高分子片基，制備喹諾酮類單克隆抗體矩陣，每樣喹諾酮類單克隆抗體重復1-10個點。
4.根據權利要求1所述的同時檢測喹諾酮類抗生素殘留量的方法，其特征在于，步驟(1)中，所述氧氟沙星、洛美沙星、培氟沙星、依諾沙星、諾氟沙星、環丙沙星、萘啶酸、氟甲喹、恩諾沙星的固定抗體濃度為1:1-1:100稀釋，點樣量為10-100nL/點。
5.根據權利要求1所述的同時檢測喹諾酮類抗生素殘留量的方法，其特征在于，步驟(2)中，所述每個孔內加入的混合標準品或待檢測樣品的量為10-100μL，濃度范圍為0.1-40ng/mL。
6.根據權利要求1所述的同時檢測喹諾酮類抗生素殘留量的方法，其特征在于，步驟(2)中，所述每個孔內加入的納米銀標記的喹諾酮類混合抗原的量為10-100μL，濃度范圍為1:2-1:128稀釋。
7.根據權利要求1所述的同時檢測喹諾酮類抗生素殘留量的方法，其特征在于，步驟(2)中，所述納米銀標記的喹諾酮類混合抗原為氧氟沙星、洛美沙星、萘啶酸、氟甲喹分別為1:4-1:128稀釋的混合抗原。
8.根據權利要求1所述的同時檢測喹諾酮類抗生素殘留量的方法，其特征在于，步驟(3)中，所述銀增強顯色液為顯色液A和顯色液B體積比1:1混合，現配現用，用量為10-100μL/孔。
9.根據權利要求1所述的同時檢測喹諾酮類抗生素殘留量的方法，其特征在于，步驟(1)和步驟(2)中，所述洗滌是指采用洗滌液洗滌2-4次，每次10-15s；步驟(3)中，所述洗滌是指采用超純水洗滌2-4次，每次10-15s。
10.根據權利要求1所述的同時檢測喹諾酮類抗生素殘留量的方法，其特征在于，步驟(2)中，所述待檢測樣品為牛奶、奶粉、奶酪、飼料、尿液、動物組織、血清、蜂蜜、蜂皇漿、雞蛋或水產品。
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