本發(fā)明提供了一種檢測銅離子的免疫熒光層析試紙條及其在檢測樣品銅離子濃度中的應(yīng)用，屬于銅離子檢測技術(shù)領(lǐng)域；所述免疫熒光層析試紙條包括依次搭接的玻璃纖維墊、硝酸纖維膜和吸水紙；所述玻璃纖維墊上噴涂有銅離子單克隆抗體?熒光微球復(fù)合物；所述硝酸纖維素膜依次設(shè)置包被銅離子檢測完全抗原的檢測線和包被二抗的質(zhì)控線；所述免疫熒光層析試紙條使用方便，靈敏度高；檢測靈敏度(IC₅₀)為3.6ng/ml，檢測范圍(IC₂₀?IC₈₀)為0.4?32.3ng/ml，檢測限(IC₁₀)為0.2ng/ml。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于重金屬免疫檢測技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種檢測銅離子的免疫熒光層析試紙條及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

重金屬在地球上廣泛分布，正常情況下不會(huì)對人類的生活環(huán)境造成危害。但隨著城市的急速擴(kuò)張和工業(yè)的快速發(fā)展，大量重金屬因人為活動(dòng)以非常態(tài)速度進(jìn)入我們的生活環(huán)境，這些重金屬及其化合物多有致畸、致癌作用，并且都是蓄積性毒物，通過飲用水或食物鏈富集等方式嚴(yán)重危害人類及動(dòng)物的健康。

目前對于環(huán)境污染最嚴(yán)重的重金屬包括：鉛、鎘、汞、鉻、砷(號(hào)稱“五毒”)，除此之外，還包括毒性相對較弱的鎳、鋅、銅、鈷、錫、釩等。雖然重金屬銅的毒性相對較弱，但是因其在工業(yè)、農(nóng)業(yè)及畜牧業(yè)的廣泛應(yīng)用，銅污染的危害也越來越多的引起人們的關(guān)注。人體攝入過量的銅會(huì)引發(fā)一系列病變，急性銅中毒可引起胃腸道黏膜刺激癥狀，如惡心、干嘔、腹瀉，甚至溶血性貧血，腎功能衰竭、休克、昏迷或死亡。慢性攝入銅過高，可引起呼吸系統(tǒng)疾病，銅粉塵可引起咽痛、咳嗽、咯痰和胸悶氣憋，甚至出現(xiàn)塵肺等。另外，銅鹽具有一定殺菌效果，所以在飼料中也被廣泛使用，但高劑量的銅進(jìn)入家畜的體內(nèi)很難被代謝，隨著生物累積效應(yīng)造成家畜中毒死亡，還會(huì)通過食用家畜肉制品而直接威脅人類健康。因此，加強(qiáng)食品和環(huán)境衛(wèi)生的重金屬銅的監(jiān)查檢測迫在眉睫，意義重大。

傳統(tǒng)重金屬檢測方法多采用物理/化學(xué)方法，如原子吸收光譜法(AAS)、原子熒光光譜法(AFS)、電感耦合等離子體光譜分析法(ICP)等，雖然其檢測結(jié)果準(zhǔn)確，可信度高，但需要大型儀器設(shè)備和專業(yè)人員操作，分析時(shí)間長，成本昂貴，有一定時(shí)間地點(diǎn)局限性，難以適應(yīng)突發(fā)性的環(huán)境污染事件或大規(guī)模環(huán)境質(zhì)量篩查檢測。現(xiàn)有的重金屬銅的檢測方法成本高、效率低、準(zhǔn)確性欠佳。

發(fā)明內(nèi)容

有鑒于此，本發(fā)明的目的在于提供一種成本低、效率高、準(zhǔn)確率高的檢測銅離子的免疫熒光層析試紙條及其應(yīng)用。

為了實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供以下技術(shù)方案：一種檢測銅離子的免疫熒光層析試紙條，包括依次搭接的玻璃纖維墊、硝酸纖維膜和吸水紙；所述玻璃纖維墊表面噴涂有銅離子單克隆抗體-熒光微球復(fù)合物；所述硝酸纖維素膜依次設(shè)置包被銅離子檢測完全抗原的檢測線和包被二抗的質(zhì)控線；所述銅離子單克隆抗體-熒光微球復(fù)合物由銅離子單克隆抗體與熒光微球偶聯(lián)獲得；所述銅離子檢測完全抗原包括銅離子、載體蛋白以及將所述銅離子與載體蛋白偶聯(lián)的螯合劑。

優(yōu)選的，所述銅離子單克隆抗體-熒光微球復(fù)合物的濃度為0.03～0.05μg/μl；所述玻璃纖維墊上銅離子單克隆抗體-熒光微球復(fù)合物的噴涂量為3～5μl/cm。

優(yōu)選的，所述銅離子單克隆抗體由雜交瘤細(xì)胞株4F12分泌產(chǎn)生，所述雜交瘤細(xì)胞株4F12的保藏編號(hào)為CCTCC NO：C201670。

優(yōu)選的，所述銅離子檢測完全抗原的噴涂濃度為0.3～0.6μg/μl；所述硝酸纖維素膜上銅離子檢測完全抗原的噴涂量為0.1～0.2μl/mm。

優(yōu)選的，所述銅離子檢測完全抗原中的螯合劑為雙功能螯合劑p-SCN-Bn-NOTA；所述載體蛋白為雞卵白蛋白OVA。

本發(fā)明還提供了所述免疫熒光層析試紙條在檢測樣品銅離子濃度中的應(yīng)用。