[發明專利]一種檢測銅離子的免疫熒光層析試紙條及其應用在審
| 申請號： | 201810559617.5 | 申請日： | 2018-06-02 |
| 公開（公告）號： | CN108717122A | 公開（公告）日： | 2018-10-30 |
| 發明（設計）人： | 向軍儉 | 申請（專利權）人： | 暨南大學 |
| 主分類號： | G01N33/577 | 分類號： | G01N33/577;G01N33/558;G01N33/533 |
| 代理公司： | 北京高沃律師事務所 11569 | 代理人： | 劉奇 |
| 地址： | 510000 廣*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 層析試紙條 免疫熒光 銅離子 玻璃纖維墊 銅離子檢測 種檢測 包被 硝酸纖維素膜 單克隆抗體 檢測靈敏度 硝酸纖維膜 檢測樣品 完全抗原 依次設置 熒光微球 復合物 檢測線 靈敏度 吸水紙 質控線 檢測 搭接 二抗 噴涂 應用 | ||
1.一種檢測銅離子的免疫熒光層析試紙條，其特征在于，包括依次搭接的玻璃纖維墊、硝酸纖維膜和吸水紙；所述玻璃纖維墊表面噴涂有銅離子單克隆抗體-熒光微球復合物；所述硝酸纖維素膜依次設置包被銅離子檢測完全抗原的檢測線和包被二抗的質控線；
所述銅離子單克隆抗體-熒光微球復合物由銅離子單克隆抗體與熒光微球偶聯獲得；
所述銅離子檢測完全抗原包括銅離子、載體蛋白以及將所述銅離子與載體蛋白偶聯的螯合劑。
2.根據權利要求1所述的免疫熒光層析試紙條，其特征在于，所述銅離子單克隆抗體-熒光微球復合物的濃度為0.03～0.05μg/μl；所述玻璃纖維墊上銅離子單克隆抗體-熒光微球復合物的噴涂量為3～5μl/cm。
3.根據權利要求1或2所述的免疫熒光層析試紙條，其特征在于，所述銅離子單克隆抗體由雜交瘤細胞株4F12分泌產生，所述雜交瘤細胞株4F12的保藏編號為CCTCCNO：C201670。
4.根據權利要求1所述的免疫熒光層析試紙條，其特征在于，所述銅離子檢測完全抗原的濃度為0.3～0.6μg/μl；所述硝酸纖維素膜上銅離子檢測完全抗原的噴涂量為0.1～0.2μl/mm。
5.根據權利要求1或4所述的免疫熒光層析試紙條，其特征在于，所述銅離子檢測完全抗原中的螯合劑為雙功能螯合劑p-SCN-Bn-NOTA；所述載體蛋白為雞卵白蛋白OVA。
6.權利要求1～5任意一項所述免疫熒光層析試紙條在檢測樣品銅離子濃度中的應用。
7.權利要求6所述的應用，其特征在于，包括以下步驟：
1)將待檢樣品滴加到玻璃纖維膜上進行層析；
2)讀取所述層析后的免疫熒光試紙條檢測線、質控線的熒光信號值Bt和Bc；
3)將所述熒光信號值Bt/Bc作為B值帶入預定的標準線性回歸方程計算獲得待檢樣品中銅離子濃度；
所述預定的標準線性回歸方程的自變量為銅離子濃度的log10對數，因變量為發光抑制率，所述因變量由式I計算得到，(B0-B)/B0×100％式I，B0為未添加待檢樣品的熒光信號值Bt0/Bc0，B為添加待檢樣品時的熒光信號值Bt/Bc。
8.根據權利要求7所述的應用，其特征在于，所述標準線性回歸方程通過以下方法獲得：
用梯度濃度的競爭物標準品Cu-NOTA替換步驟1)中的待檢樣品，按照步驟1)～2)的方法獲得競爭物標準品的熒光信號值Bt/Bc，以0ng/ml競爭物標準品的熒光信號值Bt0/Bc0為B0，計算得到梯度濃度競爭物標準品的發光抑制率，以所述發光抑制率為縱坐標，以Cu2+濃度log10對數為橫坐標，繪制標準曲線，獲得標準線性回歸方程。
9.根據權利要求7所述的應用，其特征在于，步驟1)中所述待檢樣品的滴加量為60～90μl；所述層析時間為12～18min。
10.根據權利要求7所述的應用，其特征在于，所述樣品包括中草藥樣品、土壤樣品和水樣。
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