[發(fā)明專利]一種同時檢測四環(huán)素類藥物、氟喹諾酮類藥物和磺胺類藥物的試紙條及方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201810553523.7 | 申請日: | 2018-06-01 |
| 公開(公告)號: | CN108717121B | 公開(公告)日: | 2021-05-18 |
| 發(fā)明(設(shè)計)人: | 萬宇平;何方洋;崔廷婷;崔海峰;馮才偉;龍光宗;李靜;李旭;魯曉雄;常平平 | 申請(專利權(quán))人: | 北京勤邦生物技術(shù)有限公司 |
| 主分類號: | G01N33/577 | 分類號: | G01N33/577;G01N33/558 |
| 代理公司: | 暫無信息 | 代理人: | 暫無信息 |
| 地址: | 102206 北京市昌平*** | 國省代碼: | 北京;11 |
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| 摘要: | |||
| 搜索關(guān)鍵詞: | 一種 同時 檢測 四環(huán)素 類藥物 喹諾酮類 藥物 磺胺 試紙 方法 | ||
1.一種同時檢測四環(huán)素類藥物、氟喹諾酮類藥物和磺胺類藥物的試紙條,包括試紙和微孔試劑,所述試紙包括樣品吸收墊、反應膜、吸水墊、保護膜、底板,其特征在于:所述反應膜上有三條檢測線和一條質(zhì)控線,所述三條檢測線上分別包被有四環(huán)素類藥物半抗原-載體蛋白偶聯(lián)物、氟喹諾酮類藥物半抗原-載體蛋白偶聯(lián)物、磺胺類藥物半抗原-載體蛋白偶聯(lián)物,所述質(zhì)控線上包被有羊抗鼠抗抗體;所述微孔試劑中凍干有四環(huán)素類藥物單克隆抗體-膠體金標記物、氟喹諾酮類藥物單克隆抗體-膠體金標記物和磺胺類藥物單克隆抗體-膠體金標記物;
其中,所述四環(huán)素類藥物單克隆抗體是以四環(huán)素類藥物半抗原-載體蛋白偶聯(lián)物作為免疫原制備獲得;所述氟喹諾酮類藥物單克隆抗體是以氟喹諾酮類藥物半抗原-載體蛋白偶聯(lián)物作為免疫原制備獲得;所述磺胺類藥物單克隆抗體是以磺胺類藥物半抗原-載體蛋白偶聯(lián)物作為免疫原制備獲得;
所述四環(huán)素類藥物半抗原的合成方法為:N-(4-氨苯基)馬來酰亞胺0.25g,加水2mL,加1mol/L鹽酸3.98mL,攪拌,溶解澄清,0~5℃攪拌30min,加亞硝酸鈉0.11g,繼續(xù)攪拌2h,得到重氮鹽溶液A液;取四環(huán)素0.5g,加0.1mol/L氫氧化鈉溶液10mL溶解,得到B液,將A液滴加到B液中,0~5℃攪拌4h;停止反應,用6mol/L鹽酸調(diào)節(jié)pH到7,加乙酸乙酯100mL×3,萃取三次,合并有機相,濃縮蒸干,無水乙醇重結(jié)晶,得到四環(huán)素類藥物半抗原;
所述氟喹諾酮類藥物半抗原的合成方法為:取非那沙星0.5g,加甲醇30mL溶解;取2-嗎啉甲酸0.63g,加5mL水溶解,加入到非那沙星溶液中,攪拌,加冰乙酸0.1mL,充分攪拌后,加37%甲醛0.76mL,充分攪拌,加熱回流反應4h,停止反應,旋蒸,除去甲醇,加水,加乙酸乙酯80mL×3,萃取三次,合并有機相,體積比為1:1的二氯甲烷/正己烷80mL重結(jié)晶,得到氟喹諾酮類藥物半抗原;
所述磺胺類藥物半抗原的合成方法為:取磺胺甲噁唑BATA-D-葡糖苷酸0.5g,加N,N-二甲基甲酰胺溶解,加三乙胺0.2mL,氯甲酸異丁酯0.45mL,攪拌4h,加0.18g氨基己酸,繼續(xù)攪拌3h,停止反應,加水50mL,加乙酸乙酯80mL×3,萃取三次,合并有機相,蒸干,上硅膠柱,體積比為10:1的二氯甲烷/甲醇洗脫純化,得到磺胺類藥物半抗原;
所述四環(huán)素類藥物為四環(huán)素、金霉素、強力霉素、土霉素,所述氟喹諾酮類藥物為達氟沙星、培氟沙星、諾氟沙星、環(huán)丙沙星、麻保沙星、氟甲喹、依諾沙星、氧氟沙星、恩諾沙星、沙拉沙星、雙氟沙星、洛美沙星、噁喹酸,所述磺胺類藥物為磺胺嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺氯吡嗪、磺胺對甲氧嘧啶、磺胺間甲氧嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺氯噠嗪、磺胺間二甲氧嘧啶、磺胺甲噻二唑、磺胺喹噁啉、磺胺甲噁唑、磺胺噻唑、磺胺甲氧噠嗪。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試紙條,其特征在于:所述微孔試劑上具有微孔塞。
3.根據(jù)權(quán)利要求1-2任一項所述的試紙條,其特征在于:所述樣品吸收墊上粘貼有保護膜,為檢測端,所述保護膜上面有MAX標記線。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的試紙條,其特征在于:所述檢測線位于近于有MAX標記的保護膜的一端,所述質(zhì)控線位于遠離有MAX標記的保護膜的一端。
5.一種制備權(quán)利要求1-4任一項所述試紙條的方法,其包括步驟:
1)制備凍干有四環(huán)素類藥物單克隆抗體-膠體金標記物、氟喹諾酮類藥物單克隆抗體-膠體金標記物和磺胺類藥物單克隆抗體-膠體金標記物的微孔試劑;
2)制備具有分別包被有四環(huán)素類藥物半抗原-載體蛋白偶聯(lián)物、氟喹諾酮類藥物半抗原-載體蛋白偶聯(lián)物、磺胺類藥物半抗原-載體蛋白偶聯(lián)物的三條檢測線和包被有羊抗鼠抗抗體的質(zhì)控線的反應膜;
3)將2)制備好的反應膜與樣品吸收墊、吸水墊、保護膜、底板組裝成試紙;
4)將1)和3)制備好的微孔試劑和試紙組裝成試紙條。
6.一種同時檢測樣本中四環(huán)素類藥物、氟喹諾酮類藥物和磺胺類藥物殘留的方法,其包括步驟:
1)用權(quán)利要求1-4任一項所述的試紙條進行檢測;
2)分析檢測結(jié)果。
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