[發明專利]一種G2 EPSPS蛋白溶液標準物質定值方法有效
| 申請號： | 201810431452.3 | 申請日： | 2018-05-08 |
| 公開（公告）號： | CN108614104B | 公開（公告）日： | 2021-05-11 |
| 發明（設計）人： | 李亮;金蕪軍;林敏;宛煜嵩;劉衛曉;武利慶;劉剛;柳方方 | 申請（專利權）人： | 中國農業科學院生物技術研究所 |
| 主分類號： | G01N33/531 | 分類號： | G01N33/531;G01N33/68 |
| 代理公司： | 北京華仲龍騰專利代理事務所(普通合伙) 11548 | 代理人： | 李靜 |
| 地址： | 100044 北*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 g2 epsps 蛋白 溶液 標準 物質 方法 | ||
1.一種G2 EPSPS蛋白溶液標準物質定值方法，其特征在于，包括如下步驟：
（1）采用兩種精確的蛋白質含量測定方法，即同位素稀釋質譜方法和氨基酸分析法對G2 EPSPS蛋白純品進行含量測定；
（2）采用重量法-容量法根據已經進行含量測定的G2 EPSPS蛋白純品配制出G2 EPSPS蛋白溶液標準物質，并采用ELISA法進行量值核驗，進行均勻性穩定性檢驗；
（3）配置的標準溶液中加入蛋白穩定劑，以保證蛋白標準物質的穩定儲存；
所述蛋白穩定劑包括1.5%甘氨酸、2.5%甘油、0.1%EDTA、0.01%疊氮化鈉和1%粉蘋婆提取物；所述粉蘋婆提取物的提取方法為：取粉蘋婆新鮮葉片，搗碎，加5倍重量份數的水回流提取3次，合并濾液，活性炭脫色，過濾，蒸干制成。
2. 根據權利要求1所述的G2 EPSPS蛋白溶液標準物質定值方法，其特征在于，所述步驟（1）中同位素稀釋質譜法的步驟為：
（1）G2 EPSPS蛋白溶液中加入的同濃度標記氨基酸混合溶液，氨基酸包括脯氨酸、纈氨酸、苯丙氨酸、異亮氨酸；
（2）加入氨基酸混合液的G2 EPSPS蛋白溶液在（110.0 ± 0.5）℃的烘箱中進行水解，水解后上機測定脯氨酸、苯丙氨酸、異亮氨酸、纈氨酸的相對比例，確定水解時間為48 h;
（3）另外氨基酸分析法過程中G2 EPSPS蛋白溶液其水解條件與IDMS是相同的，不同的是測定時用國家氨基酸標準物質作為外標，采用柱前衍生化方法進行外標法定量，即分別在G2 EPSPS蛋白質純品水解液中以及苯丙氨酸標準品溶液中加入配置好的衍生劑異硫氰酸苯酯（PITC）乙腈溶液和三乙胺乙腈溶液在室溫下放置50min，衍生結束后加入正己烷溶液，靜置大約10min，取下層溶液，對衍生后的水解液以及苯丙氨酸標準品溶液進行液相分析。
3. 根據權利要求1所述的G2 EPSPS蛋白溶液標準物質定值方法，其特征在于，所述步驟（2）中將同位素稀釋質譜方法進行準確含量測定的G2 EPSPS蛋白純品采用重量法-容量法配制出G2 EPSPS蛋白溶液標準物質，并用ELISA法進行量值核驗。
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