[發明專利]一種超靈敏、多殘留檢測晚期糖基化終末產物的方法和應用在審
| 申請號： | 201810294647.8 | 申請日： | 2018-03-30 |
| 公開（公告）號： | CN108508202A | 公開（公告）日： | 2018-09-07 |
| 發明（設計）人： | 趙波;王雅娟;邵科峰;王智杰;趙虎 | 申請（專利權）人： | 南京師范大學 |
| 主分類號： | G01N33/577 | 分類號： | G01N33/577 |
| 代理公司： | 南京經緯專利商標代理有限公司 32200 | 代理人： | 樓高潮 |
| 地址： | 210046 *** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 晚期糖基化終末產物 多殘留檢測 戊糖 檢測 靈敏 電化學免疫傳感器 應用 單克隆抗體能 交叉免疫反應 羧甲基賴氨酸 共價偶聯 基底電極 間接競爭 金納米線 巰基乙酸 咪唑啉酮 丙酮醛 賴氨酸 靈敏度 羧乙基 精氨 嘧啶 制備 | ||
1.一種超靈敏、多殘留檢測晚期糖基化終末產物的方法，其特征在于，包括以下步驟：
步驟1)電化學免疫傳感器的制備：首先將打磨并清洗過的金納米線電極置于巰基乙酸溶液中，使巰基乙酸自組裝于金納米線電極表面；再將其置于N-溴代琥珀酰亞胺和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽的混合溶液中，活化羧基；最后置于戊糖素溶液中，通過酰胺鍵的形成使戊糖素共價偶聯于金納米線電極表面，即得到所述的電化學免疫傳感器；
步驟2)標準溶液的配制：配制含有晚期糖基化終末產物的乙醇溶液作為標準溶液，將含有濃度為0的晚期糖基化終末產物的標準溶液作為空白標樣；
步驟3)工作曲線的建立：將步驟1)制備的電化學免疫傳感器浸入含有戊糖素單克隆抗體和步驟2)制備的標準溶液的磷酸緩沖溶液中恒溫孵育，孵育后用磷酸緩沖溶液沖洗電化學免疫傳感器，然后將其置于5mmol/L二茂鐵的乙腈溶液中進行差分脈沖伏安掃描；以孵育前后響應電流變化值ΔI對標準溶液中晚期糖基化終末產物濃度的對數值logC作圖，得ΔI-logC工作曲線，采用線性回歸法獲得ΔI-logC線性回歸方程；
步驟4)晚期糖基化終末產物的測定：配置含有待測樣品的乙醇溶液，按照與步驟3)相同的方法對所述電化學免疫傳感器進行孵育和差分脈沖伏安掃描，記錄響應電流變化值ΔIx，將其代入ΔI-logC線性回歸方程，即可得出待測樣品中晚期糖基化終末產物的濃度。
2.根據權利要求1所述的一種超靈敏、多殘留檢測晚期糖基化終末產物的方法，其特征在于，所述晚期糖基化終末產物為戊糖素、N(ε)羧甲基賴氨酸、N(ε)羧乙基賴氨酸、丙酮醛咪唑啉酮或精氨嘧啶。
3.根據權利要求1所述的一種超靈敏、多殘留檢測晚期糖基化終末產物的方法，其特征在于，步驟1)所述混合溶液中，N-溴代琥珀酰亞胺與1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽的摩爾比為2:1。
4.根據權利要求1所述的一種超靈敏、多殘留檢測晚期糖基化終末產物的方法，其特征在于，步驟2)所述乙醇溶液中，乙醇與水的體積比為2:3。
5.權利要求1～4任一項所述的超靈敏、多殘留檢測晚期糖基化終末產物的方法在AGEs臨床檢測上的應用。
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