本發明涉及一種通過流加方法提高搖瓶發酵纖細裸藻產量的方法，本發明通過流加混合氮源，能夠極大程度提高纖細裸藻在搖勻瓶中中后期的發酵水平；通過流加高濃度碳源，能夠極大程度保證纖細裸藻搖瓶發酵中后期對碳源的需求，進而能夠提高搖瓶中單批次發酵強度；通過以上操作，較大程度地提高了搖瓶發酵過程中纖細裸藻生物量的積累，本發明為纖細裸藻的小試、中試及生產提供重要的參考數據，對纖細裸藻的規模化培養有著極大的意義。

技術領域

本發明涉及一種通過流加方法提高搖瓶發酵纖細裸藻產量的方法，屬于微生物（微藻）發酵領域，涉及裸藻異養發酵的生產。

背景技術

裸藻，又稱眼蟲，是由17世紀著名的生物學家列文虎克發現并命名，屬裸藻門，裸藻綱，裸藻目中的一種單細胞藻類，因除自身含有葉綠素能夠進行光合作用外，還能夠利用自主利用自然界有機碳源進行自主營養，具有動物和植物兩種特性，裸藻細胞內含有豐富營養成分:維生素、礦物營養物、氨基酸、不飽和脂肪酸、葉綠素、黃體素、玉米黃質、GABA等59種人體每天必需的營養元素，均是維持健康所不可缺少的營養素，早在2013年裸藻就已經被審批為功能性新資源食品原料，但目前工業化養殖技術一直被日本，美國控制，國內一直還沒有突破，裸藻作為食品原材料不僅具有全營養的特性，它還含有獨特的裸藻多糖，其具有特殊的大分子多孔結構，可以吸附包裹人體中的有害物質如重金屬、嘌呤、膽固醇、中性脂肪、酒精等將它們帶出體外，因此具有抗氧化、抗病毒、清除自由基的作用。其抗癌、抗細菌活性，抗病毒(HIV)活性的能力也較為顯著。在保護肝臟、緩和過敏性皮炎、抑制嘌呤吸收和預防改善痛風方面更是具有獨特作用，又因裸藻同時具有動物和植物兩種特性，除自身光合作用進行自養營養方式外，還能夠通過攝取外界有機碳源進行異養生殖。

目前，纖細裸藻發酵的研究處于初級研究階段，存在以下的問題：

（1）缺乏高產藻株；

（2）大多研究型企業及院校尚還處在小試實驗摸索階段；

（3）生產工藝急待進一步改進；

（4）培養營養液的成本需要進一步降低；

（5）產物提取及后加工工藝需進一步優化。

在纖細裸藻高密度培養的工業化進程中主要面臨著兩方面的技術瓶頸，一是能夠篩選出高產藻株，二是通過發酵工藝的改變探索最適合纖細裸藻生長的發酵條件，攻克此兩點能夠為工業化生產的實現提供有力的保障。

發明內容

針對現有技術的不足，本發明提供一種通過流加方法提高搖瓶發酵纖細裸藻產量的方法。

本發明的目的通過下述技術方案實現：

一種通過流加方法提高搖瓶發酵纖細裸藻產量的方法，包括如下步驟：

（1）將純種纖細裸藻接種至搖瓶營養液中，置于搖床中以溫度25～35℃，轉速150～250rpm進行48～72h的恒溫恒轉速培養，得到種子培養藻液；

所述的搖瓶營養液的配方如下：(NH₄)₂SO₄ 0.8g/L～1.2g/L、KH₂PO₄ 1.8g/L～2.2g/L、酵母抽提物5.0g/L～15.0g/L、葡萄糖30.0g/L～50.0g/L、Na₂SO₄ 12.0g/L～16.0g/L、K₂SO₄ 0.60g/L～0.70g/L、MgSO₄ 1.8g/L～2.2g/L、CaCl₂ 0.25g/L～0.26g/L、微量元素溶液1.5mL/L～2.5mL/L；