[發(fā)明專利]一種通過流加方法提高搖瓶發(fā)酵纖細(xì)裸藻產(chǎn)量的方法在審
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201810190982.3 | 申請(qǐng)日: | 2018-03-08 |
| 公開(公告)號(hào): | CN108148763A | 公開(公告)日: | 2018-06-12 |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人: | 王志臻;孫發(fā)強(qiáng);王珊珊;劉珊珊 | 申請(qǐng)(專利權(quán))人: | 青島旭能生物工程有限責(zé)任公司 |
| 主分類號(hào): | C12N1/12 | 分類號(hào): | C12N1/12;C12R1/89 |
| 代理公司: | 暫無信息 | 代理人: | 暫無信息 |
| 地址: | 266000 山東省青島市黃島區(qū)*** | 國省代碼: | 山東;37 |
| 權(quán)利要求書: | 查看更多 | 說明書: | 查看更多 |
| 摘要: | |||
| 搜索關(guān)鍵詞: | 纖細(xì)裸藻 搖瓶發(fā)酵 流加 單批次發(fā)酵 規(guī)模化培養(yǎng) 參考數(shù)據(jù) 發(fā)酵水平 高濃度碳 混合氮源 生物量 搖瓶 搖勻 積累 保證 生產(chǎn) | ||
1.一種通過流加方法提高搖瓶發(fā)酵纖細(xì)裸藻產(chǎn)量的方法,包括如下步驟:
(1)將純種纖細(xì)裸藻接種至搖瓶營養(yǎng)液中,置于搖床中以溫度25~35℃,轉(zhuǎn)速150~250rpm進(jìn)行48~72h的恒溫恒轉(zhuǎn)速培養(yǎng),得到種子培養(yǎng)藻液;
所述的搖瓶營養(yǎng)液的配方如下:(NH4)2SO4 0.8g/L~1.2g/L、KH2PO4 1.8g/L~2.2g/L 、酵母抽提物5.0g/L~15.0g/L、葡萄糖30.0g/L~50.0g/L、Na2SO4 12.0g/L~16.0g/L、K2SO40.60g/L~0.70g/L、MgSO4 1.8g/L~2.2g/L、CaCl2 0.25g/L~0.26g/L、微量元素溶液1.5mL/L~2.5mL/L;
其中,微量元素溶液配方為:MnCl2·4H2O 0.82g/L~0.88g/L、FeSO4·7H2O 0.50g/L~0.55g/L、CuSO4·5H2O 0.5g/L~0.7g/L、ZnSO4·7H2O 1.40g/L~1.45g/L、NiSO4·6H2O0.05g/L~0.07g/L、CoCl2·6H2O 0.005g/L~0.008g/L、Na2MoO4·2H2O 0.008g/L~0.012g/L;
(2)將步驟(1)得到的得到種子培養(yǎng)藻液轉(zhuǎn)接到裝有營養(yǎng)液的下一級(jí)搖瓶中,接種體積為營養(yǎng)液裝液量的5~10%,于25~30℃、150~250rpm條件下進(jìn)行48~72h的恒溫恒轉(zhuǎn)速培養(yǎng),同時(shí)測(cè)定藻細(xì)胞的生物量干重;
(3)若步驟(2)得到的藻液中藻細(xì)胞的生物量干重大于18~22g/L時(shí),按步驟(1)的培養(yǎng)條件重復(fù)進(jìn)行培養(yǎng),直至藻種中纖細(xì)裸藻生物量干重達(dá)到10~12g/L;若藻液中藻細(xì)胞的生物量干重小于等于18~22g/L時(shí),則直接進(jìn)行下一步搖瓶培養(yǎng);
(4)將步驟(3)符合條件的藻液以5~10%(V/V)的接種量接種到裝有發(fā)酵培養(yǎng)基的搖瓶中,于28~32℃、125~175rpm條件下進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng);
所述的發(fā)酵培養(yǎng)基的配方為:(NH4)2SO4 0.8g/L~1.2g/L、酵母抽提物2.5g/L~3.5g/L、谷氨酸鈉8.0g/L~9.0g/L、KH2PO4 1.8g/L~2.2g/L、CaCl2 0.25g/L~0.26g/L、葡萄糖50.0g/L~70.0g/L、玉米漿干粉4.0g/L~5.0g/L、Na2SO4 12.0g/L~16.0g/L、MgSO4 1.8g/L~2.2g/L、K2SO4 0.60g/L~0.70g/L、微量元素溶液 1.5mL/L~2.5mL/L;
(5)發(fā)酵培養(yǎng)50~70h后,待發(fā)酵罐營養(yǎng)液中葡萄糖含量降至10g/L以下開始多次流加葡萄糖溶液,使葡萄糖含量控制在30~50g/L之間,同時(shí)在發(fā)酵培養(yǎng)30~40h期間進(jìn)行流加氮源溶液,氮源溶液的流加量為搖瓶裝液量的1/5~1/4,發(fā)酵培養(yǎng)至80~120h期間時(shí),定時(shí)測(cè)定發(fā)酵過程葡萄糖消耗速率,待其降至2g/L·h以下,停止葡萄糖溶液流加,直至剩余葡萄糖耗盡后停止發(fā)酵。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的通過流加方法提高搖瓶發(fā)酵纖細(xì)裸藻產(chǎn)量的方法,其特征在于,步驟(1)~(3)中所述的搖瓶的體積為250mL,裝液量為50mL。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的通過流加方法提高搖瓶發(fā)酵纖細(xì)裸藻產(chǎn)量的方法,其特征在于,步驟(5)流加的葡萄糖溶液濃度為700.0~750.0g/L。
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