[發明專利]基于雙分子熒光互補的新型信使RNA和環狀RNA標記方法在審
| 申請號： | 201810171519.4 | 申請日： | 2018-03-01 |
| 公開（公告）號： | CN108486107A | 公開（公告）日： | 2018-09-04 |
| 發明（設計）人： | 邵世鵬;孫超英;孫育杰 | 申請（專利權）人： | 北京大學 |
| 主分類號： | C12N15/113 | 分類號： | C12N15/113;C09K11/06;G01N21/64 |
| 代理公司： | 北京萬象新悅知識產權代理事務所(普通合伙) 11360 | 代理人： | 蘇愛華 |
| 地址： | 100871*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 分子熒光 環狀RNA 信使RNA 融合蛋白 標簽 單分子 活細胞 熒光 細胞生物學 追蹤 高時空分辨率 細胞 成像觀測 傳遞系統 固定細胞 合適位置 結合蛋白 遺傳信息 熒光背景 標記RNA 適配子 無干擾 長時 侵入 融合 應用 開發 | ||
1.一種基于自連接標簽的雙分子熒光互補的新型細胞內信使RNA和環形RNA標記方法，其特征在于，在待標記的信使RNA或環形RNA的合適位置插入相應的適配子序列，利用分裂的自連接標簽融合適配子結合蛋白，從而實現活細胞內無熒光背景的信使RNA和環形RNA的單分子標記和成像。
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，在融合蛋白不結合信使RNA分子時不發熒光，在其結合信使RNA分子時發出熒光，從而降低成像背景。
3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，在融合蛋白不結合環狀RNA分子時不發熒光，在其結合環狀RNA分子時發出熒光，在其結合到線性的RNA上時不發熒光，從而特異性標記環狀RNA并降低成像背景。
4.根據權利要求1-3所述的方法，其特征在于，所使用的體系可以是活細胞，也可以是固定細胞。
5.根據權利要求1-3所述的方法，一種基于自連接標簽的雙分子熒光互補的新型細胞內信使RNA和環形RNA標記方法，其特征在于，所使用的自連接標簽可以是HaloTag，SnapTag，ClipTag等。
6.根據權利要求1-5所述的方法，一種基于自連接標簽的雙分子熒光互補的新型細胞內信使RNA和環形RNA標記方法，其特征在于，所使用的熒光染料為小分子透膜染料。
7.根據權利要求1-6所述的方法，一種基于雙分子熒光互補的新型細胞微絲骨架標記方法，其特征在于，由以下步驟制備：
先在待標記的信使RNA或環形RNA的合適位置插入相應的適配子序列，再確定自連接標簽蛋白的分裂位點，構建分裂的自連接標簽和適配子結合蛋白的融合蛋白，將所構建的質粒共轉染哺乳動物細胞，加入染料在顯微鏡下觀察細胞內信使RNA或環形RNA結構和動態。
8.權利要求1-7所述的方法在正常條件下細胞中信使RNA或環形RNA的標記和成像中的應用。
9.權利要求1-7所述的方法在病理或者加藥條件下細胞中信使RNA或環形RNA的標記和成像中的應用。
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