[發明專利]一種革蘭氏染色質控片及其制作方法和應用有效
| 申請號： | 201810163179.0 | 申請日： | 2018-02-26 |
| 公開（公告）號： | CN108359620B | 公開（公告）日： | 2020-09-01 |
| 發明（設計）人： | 方舒;張永靜;鐘思夏;陶露;徐虹;高玉榮 | 申請（專利權）人： | 巢湖學院 |
| 主分類號： | C12N1/20 | 分類號： | C12N1/20;C12Q1/14;C12Q1/10;C12R1/19;C12R1/445 |
| 代理公司： | 安徽知問律師事務所 34134 | 代理人： | 代群群 |
| 地址： | 238000 安*** | 國省代碼： | 安徽;34 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 革蘭氏 染色質 及其 制作方法 應用 | ||
1.一種革蘭氏染色質控片的制作方法，其特征在于，包括以下步驟：
(1)準備載玻片(4)并在載玻片(4)的一端為標記區(1)，用于記錄待檢測樣品菌種的信息；
(2)在載玻片(4)上設置質控菌區(2)和樣品菌區(3)，且質控菌區(2)和樣品菌區(3)及標記區(1)互不重疊；
(3)準備防水膠布(5)和雙面防水膠片(6)，所述雙面防水膠片(6)的厚度尺寸為3mm-6mm，并將防水膠布(5)和雙面防水膠片(6)黏合在一起后；接著將防水膠布(5)和雙面防水膠片(6)進行貫通打孔，再將防水膠布(5)的一面貼合在質控菌區(2)上并形成凸起邊緣；質控菌區(2)經紫外照射處理后，最后將防水貼紙(7)跟雙面防水膠片(6)的一面貼合；制得保護罩；
(4)將大腸桿菌和金黃色葡萄球菌分別進行培養；經培養后的大腸桿菌菌液和金黃色葡萄球菌菌液進行混合，制得質控菌液；隨后將質控菌液加入保護罩的雙面防水膠片(6)上的孔內，制得待處理的革蘭氏染色質控片；
(5)將步驟(4)制得的所述待處理的革蘭氏染色質控片進行干燥處理，隨后將所述待處理的革蘭氏染色質控片中與所述質控菌區(2)相對的背面在酒精燈火焰上方通過2-3次進行固定，然后將質控菌區(2)的雙面防水膠片(6)上的孔置于260nm波長的紫外燈正下方25cm-30cm處，紫外照射15min-25min，照射處理后準備防水貼紙(7)，并將防水貼紙(7)貼合在雙面防水膠片(6)的另一面。
2.根據權利要求1所述一種革蘭氏染色質控片的制作方法，其特征在于：所述大腸桿菌菌液為將大腸桿菌培養后OD值控制在0.2-0.8的培養液；所述金黃色葡萄球菌菌液為將金黃色葡萄球菌培養后OD值控制在0.2-0.8的培養液。
3.根據權利要求2所述一種革蘭氏染色質控片的制作方法，其特征在于：所述質控菌液為所述大腸桿菌菌液與所述金黃色葡萄球菌菌液按照體積比為5:3進行混合制得的。
4.根據權利要求1所述一種革蘭氏染色質控片的制作方法，其特征在于：所述步驟(5)干燥處理的溫度控制在35℃-45℃，所述干燥處理采用電熱鼓風干燥箱。
5.根據權利要求3所述一種革蘭氏染色質控片的制作方法，其特征在于：所述步驟(5)干燥處理的溫度控制在40℃，所述紫外照射處理時間為20min。
6.根據權利要求1所述一種革蘭氏染色質控片的制作方法，其特征在于：步驟(3)中所述打孔的孔徑尺寸為5mm-6mm。
7.一種革蘭氏染色質控片，其特征在于：采用權利要求1所述一種革蘭氏染色質控片的制作方法進行制作而成。
8.一種革蘭氏染色質控片的應用，其特征在于：包括以下步驟：
(1)將培養后的待測樣品菌進行移取，制得樣品菌液；
(2)權利要求7中所述一種革蘭氏染色質控片，在標記區(1)將樣品菌的信息進行登記；
(3)將樣品菌液滴加至樣品菌區(3)，然后將樣品菌液進行涂片、干燥和固定的處理，接著將革蘭氏染色質控片的保護罩沿著凸起邊緣撕去；將革蘭氏染色質控片中質控菌區(2)和樣品菌區(3)同時進行革蘭氏染色操作；
(4)革蘭氏染色操作后進行鏡檢，首先觀察質控菌的染色區域，若看到紅色桿菌與紫色球菌或藍紫色球菌，說明染色過程正確，再觀察樣品菌的染色區域，紫色或藍紫色表示樣品菌為革蘭氏陽性菌，紅色表示樣品菌為革蘭氏陰性菌；若觀察質控菌的染色區域，未看到紅色桿菌與紫色球菌或藍紫色球菌，說明染色過程失敗，需要重新進行染色或更換合適革蘭氏染色試劑。
9.根據權利要求8所述一種革蘭氏染色質控片的應用，其特征在于：步驟(1)中所述移取方式為采用接種環進行操作。
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