本發明公開了一種PCA3和PSA基因檢測試劑盒及其使用方法，其括有針對PCA3/或PSA基因引物和探針，其中，針對PCA3基因的引物和探針序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2、以及SEQ ID NO.3所示，針對A基因的引物和探針序列如SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8、以及SEQ ID NO.9所示。所示PCA3和PSA基因檢測試劑盒，通過采集人體尿液進行外泌體RNA的提取，通過檢測PCA3mRNA和PSA mRNA，測定PCA3mRNA/PSA mRNA比值，計算PCA3評分，從而實現早期診斷前列腺腫瘤，無創取樣，避免前列腺穿刺，減輕病人痛苦，同時具有較高的靈敏度、高特異性和穩定性。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及PCA3和PSA基因檢測試劑盒及其應用。

背景技術

在世界范圍內，前列腺癌發病率位居男性惡性腫瘤第二位。近年來，我國前列腺癌發病率逐漸升高，多數地區新確診患者中晚期比例高于歐美國家，這將對我國前列腺癌患者的治療效果及長期生存產生直接影響。以前我國前列腺癌發病率較低，但近年來呈顯著上升趨勢。自2008年起，前列腺癌已成為泌尿系統發病率最高的惡性腫瘤，國內前列腺癌發病率城鄉差異較大，特別是大城市的發病率更高。近年來發現的前列腺癌新的標記物PCA3，在前列腺癌中高表達，可反應前列腺癌進展情況。PCA3位于9號染色體，含有4個外顯子，為非編碼的mRNA，通過選擇性剪切和多聚腺苷酸化產生至少四種不同的轉錄產物。 RT-PCR分析顯示PCA3僅在前列腺組織中表達，在其他組織中不表達。PCA3在95％的檢測的全部前列腺癌中過度表達，可從前列腺癌變細胞中無害測定，且準確度接近100％。此外，在前列腺外組織(良性和惡性)中尚未檢測到PCA3轉錄，證明PCA3是目前已知前列腺癌最具特異性的PCa標志物。PCA3不受年齡，前列腺體積或其他前列腺病的影響。 Northern blot檢測分析50例患者中47例PCA3高度表達，而前列腺良性病變組織中不表達或低度表達。文獻(cancerres.，2002，May1；62(9)2695-8)報道比較端粒酶RNA和 PCA3 RNA作為前列腺癌的標記物，PCA3指示作用更優。PCA3作為目前為止針對前列腺癌特異性最優的標志物，含有4個外顯子，三個內含子，Gandini et al2003等文獻報道，與其它外顯子相比，PCA3外顯子4用于前列腺癌檢測特異性最優。PCA3基因特異性地高表達于人類前列腺癌細胞和轉移壞死灶中，在正常前列腺、良性前列腺增生細胞中不表達或低表達。PSA主要有前列腺細胞合成，在其他組織細胞中不表達或低表達，PSA RNA表示樣本中的前列腺特異性細胞的量。之前的檢測，主要通過前列腺穿刺實現，通過尿液無創檢測，可以減少部分患者不必要的前列腺穿刺，減輕病人痛苦。因此，建立通過以尿液為樣本，且檢測效果好的試劑盒就非常有必要，而且通過檢測結果，判斷是否還需要做進一步的前列腺穿刺。

發明內容

本發明的目的之一是提供一種PCA3和PSA基因檢測試劑盒，該檢測試劑盒只需要以尿液作為檢測樣本，不需要進行前列腺穿刺就能得到很好的檢測結果，而且，可以指導是否需要前列腺穿刺。

實現上述目的技術方案如下。

一種PCA3和PSA基因檢測試劑盒，包括有針對PCA3和PSA基因引物和探針，其中，針對PCA3基因的引物和探針序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2以及SEQ ID NO.3所示，

針對PSA基因的引物和探針序列如SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8以及SEQ ID NO.9所示。

在其中一個實施例中，還包括有內參引物和內參探針，所述內參引物的序列如SEQID NO.4和SEQ ID NO.5所示，所述內參探針的序列如SEQ ID NO.6所示。

在其中一個實施例中，還包括有外泌體沉淀溶液、裂解液、RNA提取試劑和清洗液。