[發(fā)明專利]PCA3和PSA基因檢測(cè)試劑盒及其應(yīng)用在審
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201810098145.8 | 申請(qǐng)日： | 2018-01-31 |
| 公開（公告）號(hào)： | CN108441557A | 公開（公告）日： | 2018-08-24 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 陽衛(wèi)超;麥家杰;鄧秀磊;胡守旺;黃若磐 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 廣州瑞博奧生物科技有限公司 |
| 主分類號(hào)： | C12Q1/6886 | 分類號(hào)： | C12Q1/6886;C12Q1/6806 |
| 代理公司： | 廣州華進(jìn)聯(lián)合專利商標(biāo)代理有限公司 44224 | 代理人： | 萬志香 |
| 地址： | 510530 廣*** | 國(guó)省代碼： | 廣東;44 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 檢測(cè)試劑 引物 探針序列 前列腺穿刺 前列腺腫瘤 人體尿液 早期診斷 靈敏度 取樣 探針 無創(chuàng) 采集 檢測(cè) 痛苦 應(yīng)用 | ||
1.一種PCA3和PSA基因檢測(cè)試劑盒，其特征是，包括有針對(duì)PCA3和PSA基因引物和探針，其中，針對(duì)PCA3基因的引物和探針序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2以及SEQ ID NO.3所示，
針對(duì)PSA基因的引物和探針序列如SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8以及SEQ ID NO.9所示。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的PCA3和PSA基因檢測(cè)試劑盒，其特征是，還包括有內(nèi)參引物和內(nèi)參探針，所述內(nèi)參引物的序列如SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5所示，所述內(nèi)參探針的序列如SEQ ID NO.6所示。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的PCA3和PSA基因檢測(cè)試劑盒，其特征是，還包括有外泌體沉淀溶液、RNA提取試劑、清洗液。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的PCA3和PSA基因檢測(cè)試劑盒，其特征是，所述外泌體沉淀溶液的組成為：Poly(ethylene glycol)，NaCl和ddH2O。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的PCA3和PSA基因檢測(cè)試劑盒，其特征是，所述RNA提取試劑的組成為：含固量為50％的磁珠，乙醇。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的PCA3和PSA基因檢測(cè)試劑盒，其特征是，所述清洗液的組成為：0.1M NaCl，異丙醇，乙醇，ddH2O。
7.權(quán)利要求1-6任一項(xiàng)所述的PCA3和PSA基因檢測(cè)試劑盒的使用方法，其特征是，包括提取外泌體RNA；配置PCR反應(yīng)液；進(jìn)行熒光PCR反應(yīng)。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的使用方法，其特征是，提取外泌體RNA的操作步驟包括：
(1)將人體尿液樣本離心以獲得上清液；
(2)在上清液中加入外泌體沉淀溶液，人體尿液樣本和外泌體沉淀溶液的體積比為1：1，混勻，室溫靜置1小時(shí)/4℃過夜后，以13000rpm/分鐘的速度離心10分鐘，以形成外泌體沉淀物；
(3)在所述外泌體沉淀物中加入總RNA提取試劑以及抗體標(biāo)記磁珠，靜置10分鐘，每?jī)煞昼娚舷骂嵉?～6次，使磁珠在管內(nèi)分布均勻；
(4)加入清洗液，重復(fù)清洗2遍后，加入80％乙醇；
(5)洗脫，從而獲取外泌體RNA。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的使用方法，其特征是，針對(duì)PCA3基因的反應(yīng)液如下：
針對(duì)PSA基因的反應(yīng)液如下：
。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的使用方法，其特征是，熒光PCR反應(yīng)的條件如下：
。
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