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[發明專利]一種測定β-淀粉酶活力的方法有效

專利信息
申請號: 201810073151.8 申請日: 2018-01-25
公開(公告)號: CN108195782B 公開(公告)日: 2020-01-21
發明(設計)人: 李崎;汪薛良;段鴻緒;劉春鳳;鈕成拓;李永仙;鄭飛云;王金晶 申請(專利權)人: 江南大學
主分類號: G01N21/31 分類號: G01N21/31
代理公司: 23211 哈爾濱市陽光惠遠知識產權代理有限公司 代理人: 張勇
地址: 214122 江蘇*** 國省代碼: 江蘇;32
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摘要:
搜索關鍵詞: 淀粉酶 淀粉酶活力 麥芽 糖苷 對硝基苯酚 靈敏度 酶活 顯色法 線性擬合 應用結果 混合物 酶制劑 耗時 優化
【權利要求書】:

1.一種測定β-淀粉酶活力的方法,其特征在于,所述方法是聯合采用對硝基苯酚麥芽戊糖苷法和DNS法測定待測樣品中β-淀粉酶活力,所述方法中待測樣品中β-淀粉酶的濃度為12-60μg/mL,所述方法具體是:

(1)采用純化的β-淀粉酶稀釋為不同濃度,分別采用對硝基苯酚麥芽戊糖苷法和DNS法測定反應后的吸光值;

(2)將對硝基苯酚麥芽戊糖苷法和DNS法測定的吸光值進行相關性分析,確定線性濃度范圍;

(3)將純化的β-淀粉酶稀釋至步驟(2)的線性濃度范圍內進行檢測,建立線性擬合曲線回歸方程y=0.0079x+0.0089,x為DNS法測得的β-淀粉酶的酶活,y為對硝基苯酚麥芽戊糖苷法測得的OD400值,所述OD400值為400nm下β-淀粉酶的吸光度值,R2值為0.9886;

(4)將待測樣品采用對硝基苯酚麥芽戊糖苷法進行測定,利用回歸方程計算β-淀粉酶活力;

所述對硝基苯酚麥芽戊糖苷法具體為:取10~30μL酶液與專一性底物對硝基苯酚麥芽戊糖溶液一同置于50~60℃下保溫2~4min后混合,50~60℃下反應10~15min,加入200~400μL終止緩沖液,取反應液測定400nm處的吸光值;

所述DNS法具體為:分別將1~2mL酶液和淀粉溶液置于50~60℃恒溫水浴10~15min,再向酶液中加入1~2mL 1~2%淀粉溶液,50~60℃恒溫水浴中10~15min,置于冰水浴2~4min終止反應,然后加入2~4mL DNS試劑,混勻,沸水浴中煮沸10~15min,取出冷卻,用水定容至25mL,在540nm處測定吸光值。

2.權利要求1所述的方法在啤酒釀造、食品加工中的應用。

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