技術領域

本發明涉及一種可注射的脫細胞小腸黏膜下層基質微粒及其制備方法與應用，屬于再生醫學領域。

背景技術

注射微整形技術，是微整形的一種形式，以其微創、無痛和恢復期短等優勢受到人們的追捧，是近幾年流行起來的整形項目。在頜面部軟組織缺陷的修復治療、隆鼻和隆下巴中也逐漸顯示出其創傷小、恢復快的獨特優勢。無論是單獨使用還是作為正頜、正畸修復手術的補充，微創注射技術在創傷重建，頜面部軟組織缺陷修復，隆鼻和隆下巴中具有廣闊的應用前景。

目前可以注射的材料主要有膠原蛋白，膠原蛋白可使表皮細胞變得豐滿，從而使肌膚滋潤、光滑、水嫩，具有彈性，隨著年齡的增長，肌膚內的膠原白也隨之減少，面部注射膠原蛋白就顯得尤為重要。膠原蛋白中獨有的羥脯氨酸具有收緊結締組織的作用，能使松弛的組織緊實。但膠原蛋白由于體內膠原蛋白酶的存在，即便通過交聯后的蛋白質，其維持時間也不超過六個月，需要定期注射以達到良好的治療效果。還有一種注射材料是透明質酸，通過將其注射到面部真皮而達到修復較深層皺紋，還可以用來豐唇、隆下巴和隆鼻，使皮膚恢復彈性和光澤。注射后維持時間為六個月。而注射肉毒素，可以抑制周圍運動神經末梢突觸前膜乙酰膽堿釋放，阻斷神經和肌肉之間的信息傳導，從而引起肌肉的松弛性麻痹。肉毒素可以除去皺紋，但是維持時間為6-8個月。

中國專利CN200510044005.5公開了一種可注射軟組織生物填充材料的制備方法，該方法采用豬皮經脫脂，脫細胞，戊二醛交聯等工序，物理加工制成微粒。該專利制備微粒的方法只是將交聯后材料通過物理方法切割成邊長為 300-500μm的微粒，然而其微粒粒徑過大，無法采用直徑較小的針頭注射，從而限制其在注射整形領域的實用價值。

中國專利CN02156797.2公開了一種注射性膠原蛋白的制備方法及其產品和應用，該方法采用動物組織中的膠原蛋白纖維類制備注射性膠原蛋白，然而在制備過程中會破壞動物組織原有結構及其他成分，也損失了組織中具有生物活性或生物功能的活性成分，只能單純起到膠原蛋白的填充作用。

如上所述，目前已上市的一些微創注射整形植入材料及國內同類專利公開的微創注射整形植入材料制備方法均存在一定的缺點，尤其是膠原和透明質酸植入劑產品，并未包含生物活性因子，因此其作用僅僅是填充，當這些填充材料被機體降解吸收后，組織修復效果就會消失，使其效果不佳。目前尚無采用脫細胞小腸黏膜下層為原料制備可注射的填充材料的產品，亦無專利及文獻報道。

現有技術產品在注射后未被降解的時間內，會起到一定的填充，抗皺作用，但是這材料隨著植入時間的延長，會被機體的相關酶類逐漸降解吸收，由于其不存在活性成分，因此效果也會消失。

發明內容

本發明的目的在于克服上述現有技術的不足之處而提供一種富含生物活性成分、結構疏松多孔的可注射的脫細胞小腸黏膜下層基質微粒及其制備方法與應用。

為實現上述目的，本發明采取的技術方案為：一種可注射的脫細胞小腸黏膜下層基質微粒的制備方法，其包括以下步驟：

(1)取動物小腸組織，依次進行漂洗、消毒和反復凍融處理；

(2)將動物小腸組織剪斷，刮除小腸的黏膜層、肌肉層和漿膜層，得到剝離的小腸黏膜下層，將剝離的小腸黏膜下層浸泡于氯化鈉溶液中；

(3)將小腸黏膜下層進行脫細胞處理，然后進行漂洗；

(4)將經步驟(3)處理的小腸黏膜下層置于緩沖溶液中浸泡后，再置于除垢劑中震蕩萃取20-30小時，漂洗；

(5)將經步驟(4)處理的小腸黏膜下層置于緩沖溶液中浸泡，然后冷凍干燥、研磨，得到可注射的脫細胞小腸黏膜下層基質微粒。

作為本發明所述的可注射的脫細胞小腸黏膜下層基質微粒的制備方法的優選實施方式，所述步驟(1)采用消毒劑進行消毒，所述消毒劑由(Ⅰ)體積分數為5-30％的乙醇水溶液，和(∏)體積分數為0.2-2％的過氧乙酸水溶液和/或體積分數為0.5-10％的過氧化氫水溶液組成；所述步驟(1)中，反復凍融的方法為：將動物小腸組織置于-80℃冰箱中冷凍0.5-3小時，然后取出，于37℃下解凍0.1-1小時；反復凍融的次數為2-5次。

作為本發明所述的可注射的脫細胞小腸黏膜下層基質微粒的制備方法的優選實施方式，所述動物小腸組織為哺乳動物小腸組織；優選的，所述動物小腸組織取自屠宰兩小時內哺乳動物的小腸組織。