[發明專利]一種可注射的脫細胞小腸黏膜下層基質微粒及其制備方法與應用在審
| 申請號: | 201711457567.1 | 申請日: | 2017-12-27 |
| 公開(公告)號: | CN107929809A | 公開(公告)日: | 2018-04-20 |
| 發明(設計)人: | 楊偉紅;程飚;王祥林;耿夢夢;晏蘭;蘇玉天;劉江輝 | 申請(專利權)人: | 廣州昕生醫學材料有限公司 |
| 主分類號: | A61L27/36 | 分類號: | A61L27/36;A61L27/56;A61L27/50;A61L27/54 |
| 代理公司: | 廣州三環專利商標代理有限公司44202 | 代理人: | 郝傳鑫,周全英 |
| 地址: | 510663 廣東省廣州市高新技術產業*** | 國省代碼: | 廣東;44 |
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| 摘要: | |||
| 搜索關鍵詞: | 一種 注射 細胞 小腸 黏膜 下層 基質 微粒 及其 制備 方法 應用 | ||
1.一種可注射的脫細胞小腸黏膜下層基質微粒的制備方法,其特征在于,包括以下步驟:
(1)取動物小腸組織,依次進行漂洗、消毒和反復凍融處理;
(2)將動物小腸組織剪斷,刮除小腸的黏膜層、肌肉層和漿膜層,得到剝離的小腸黏膜下層,將剝離的小腸黏膜下層浸泡于氯化鈉溶液中;
(3)將小腸黏膜下層進行脫細胞處理,然后進行漂洗;
(4)將經步驟(3)處理的小腸黏膜下層置于緩沖溶液中浸泡后,再置于除垢劑中震蕩萃取20-30小時,漂洗;
(5)將經步驟(4)處理的小腸黏膜下層置于緩沖溶液中浸泡,然后冷凍干燥、研磨,得到可注射的脫細胞小腸黏膜下層基質微粒。
2.如權利要求1所述的可注射的脫細胞小腸黏膜下層基質微粒的制備方法,其特征在于,所述步驟(1)采用消毒劑進行消毒,所述消毒劑由(Ⅰ)體積分數為5-30%的乙醇水溶液,和(∏)體積分數為0.2-2%的過氧乙酸水溶液和/或體積分數為0.5-10%的過氧化氫水溶液組成;所述步驟(1)中,反復凍融的方法為:將動物小腸組織置于-80℃冰箱中冷凍0.5-3小時,然后取出,于37℃下解凍0.1-1小時;反復凍融的次數為2-5次。
3.如權利要求1所述的可注射的脫細胞小腸黏膜下層基質微粒的制備方法,其特征在于,所述步驟(2)中,將剝離的小腸黏膜下層浸泡于氯化鈉溶液中3-6小時,氯化鈉溶液中氯化鈉的濃度為0.5-3mmol/L。
4.如權利要求1所述的可注射的脫細胞小腸黏膜下層基質微粒的制備方法,其特征在于,所述步驟(3)中,脫細胞處理的方法為:將小腸黏膜下層先置于脫細胞液A中浸泡8-24小時,漂洗,再置于脫細胞液B中浸泡8-24小時;其中,所述脫細胞液A含有下述質量百分比的組分:(a)0.01-1%EDTA三鈉或四鈉,和(b)2-10%碳酸鈉、碳酸鉀、磷酸鈉或磷酸鉀;所述脫細胞液B含有下述濃度的組分:(c)0.8-2mol/L HCl、磷酸、硫酸、醋酸、乳酸或甘醇酸,和(d)0.8-4mol/L氯化鈉、氯化鉀、硫酸鈉或硫酸鉀;所述脫細胞液A和脫細胞液B與小腸黏膜下層的體積比均為4-30:1。
5.如權利要求1所述的可注射的脫細胞小腸黏膜下層基質微粒的制備方法,其特征在于,所述步驟(4)中,除垢劑為曲拉通溶液,所述曲拉通溶液中曲拉通的質量百分比為1-4%。
6.如權利要求1所述的可注射的脫細胞小腸黏膜下層基質微粒的制備方法,其特征在于,所述步驟(5)為:將經步驟(4)處理的小腸黏膜下層置于緩沖溶液中浸泡10-16小時,然后冷凍干燥、研磨,再篩選粒徑為20-200μm的微粒,即為可注射的脫細胞小腸黏膜下層基質微粒。
7.一種采用如權利要求1~6任一項所述方法制得的可注射的脫細胞小腸黏膜下層基質微粒。
8.一種植入劑,其特征在于,含有如權利要求7所述的可注射的脫細胞小腸黏膜下層基質微粒和植入輔料,所述可注射的脫細胞小腸黏膜下層基質微粒的質量與所述植入輔料的體積的比為1:1~10g/mL。
9.如權利要求8所述的植入劑,其特征在于,所述植入輔料包括磷酸鹽緩沖溶液、生理鹽水、自體富血小板血漿、聚電解質溶液中的至少一種;優選地,所述聚電解質溶液中的聚電解質為氧化纖維素、羧甲基甲殼素、羧甲基殼聚糖、羧甲基纖維素鈉、透明質酸、硫酸軟骨素、海藻糖鈉、聚谷氨酸中的至少一種,所述聚電解質溶液中聚電解質的濃度為0.5-40g/L。
10.如權利要求8或9所述的植入劑,其特征在于,所述植入輔料還包括細胞生長因子、局部麻醉劑中的至少一種;所述植入輔料中,細胞生長因子的濃度為0.1-100mg/L,局部麻醉劑的濃度為0.1-20g/L。
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