本發明公開了一種重組抗TNF?α全人源單克隆抗體的純化方法，包括對抗體進行陽離子交換色譜洗脫，其過程具體包括：平衡上樣后，首先采用平衡緩沖液1第一次淋洗，接著采用平衡緩沖液2第二次淋洗，接著采用平衡緩沖液2和平衡緩沖液3的混合液第三次淋洗，最后進行洗脫獲得純化抗體；其中，平衡緩沖液1為磷酸鹽緩沖液或醋酸鹽緩沖液，平衡緩沖液2為磷酸鹽緩沖液或醋酸鹽緩沖液，平衡緩沖液3為磷酸鹽緩沖液或醋酸鹽緩沖液。本發明降低了重組抗TNF?α全人源單克隆抗體中的酸性組分含量，并且提高了重組抗TNF?α全人源單克隆抗體的純度。

技術領域

本發明涉及抗體純化技術領域，尤其涉及一種重組抗TNF-α全人源單克隆抗體的純化方法。

背景技術

TNF-α是一種促炎細胞因子，在自身免疫性疾病發病機制中起重要作用，類風濕性關節炎(RA)、幼年特發性關節炎(JIA)、銀屑病關節炎(PsA)和強直性脊柱炎(AS)患者關節滑液中均發現TNF-α水平增高，斑塊型銀屑病(PPs)患者體內也發現TNF-α水平增高，所有這些都證明TNF-α參與了諸多疾病過程，成了疾病治療的重要靶標，開發特異靶向抗體藥物成了一個研究熱點，目前已經獲美國FDA批準上市的TNF-α靶向抗體有全人源的阿達木單抗(Adalimumab)、新型戈利木單抗(golimumab)、聚乙二醇化抗體片段塞妥珠單抗(Certolizumab)等。

重組抗TNF-α全人源單克隆抗體是全人源的IgG1類免疫球蛋白，由整合抗TNF-α全人源單克隆抗體基因的CHO(中國倉鼠卵巢細胞)培養獲得。由于IgG1類抗體可以特異性地和protein A結合，因此可以通過親和層析捕獲。但是，在細胞表達過程中，會有很多因素會影響電荷變異體的形成，如：重鏈C末端賴氨酸的截除、N末端焦谷氨酸環化、天冬酰胺、谷氨酰胺殘基的脫氨基作用以及不同的糖基化修飾、氧化等。電荷變異體，特別是酸性電荷變異體會引起人體的免疫原性，已經成為單克隆抗體藥物工藝中關鍵質量屬性之一。由于這些電荷變異體表面帶電荷分部不均一，可通過離子層析來去除。但是，由于不同的酸性變異體有著相似的理化性質，單一的淋洗方式對變異體去除效果不顯著，很難滿足正常生產需求。

發明內容

基于背景技術存在的技術問題，本發明提出了一種重組抗TNF-α全人源單克隆抗體的純化方法，本發明降低了重組抗TNF-α全人源單克隆抗體中的酸性組分含量，并且提高了重組抗TNF-α全人源單克隆抗體的純度。

本發明提出的一種重組抗TNF-α全人源單克隆抗體的純化方法，首先將整合了TNF-α克隆抗體基因的CHO細胞為表達系統培養細胞液，接著將細胞液經深層過濾去除細胞器以及細胞碎片，最后將過濾后的細胞液經過Protein A親和層析后上樣于平衡后的陽離子層析柱中；其中，所述層析柱的填料為磺酸基(-SO3H)陽離子交換層析介質，上樣細胞液中重組抗TNF-α全人源單克隆抗體的濃度為6.88mg/mL，填料實際載量為15mg/mL；平衡上樣后，首先采用平衡緩沖液1第一次淋洗，接著采用平衡緩沖液2第二次淋洗，接著采用平衡緩沖液2和平衡緩沖液3的混合液第三次淋洗，最后進行洗脫獲得純化抗體；其中，平衡緩沖液1為磷酸鹽緩沖液或醋酸鹽緩沖液，平衡緩沖液2為磷酸鹽緩沖液或醋酸鹽緩沖液，平衡緩沖液3為磷酸鹽緩沖液或醋酸鹽緩沖液。

優選地，第一次淋洗中，平衡緩沖液1中磷酸根離子或醋酸根離子的濃度為20-40mmol/L。

優選地，第一次淋洗中，平衡緩沖液1的pH值為4.8-5.2。

優選地，第一次淋洗中，平衡緩沖液1中還含有氯化鈉。

優選地，所述氯化鈉的濃度為30-70mmol/L。

優選地，第二次淋洗中，平衡緩沖液2中磷酸根離子或醋酸根離子的濃度為30-70mmol/L。

優選地，第二次淋洗中，平衡緩沖液2的pH值為5.8-6.6。