一種基于萘酰亞胺的β?葡萄糖醛酸苷酶的熒光探針及其應(yīng)用，其屬于生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。它可用于測定不同來源生物體系中β?葡萄糖醛酸苷酶的酶活性。以HC?glu作為特異性探針反應(yīng)底物，借助β?葡萄糖醛酸苷酶體外反應(yīng)體系，以β?葡萄糖醛酸苷水解反應(yīng)為探針反應(yīng)，通過定量檢測單位時(shí)間內(nèi)苷元代謝產(chǎn)物的生成量來測定各生物樣品中β?葡萄糖醛酸苷酶的活性。本發(fā)明可用于不同個(gè)體來源人和動(dòng)物組織樣本、不同種屬細(xì)胞及細(xì)胞制備物、以及各種植物和微生物中β?葡萄糖醛酸苷酶活性的定性、定量測定，并可實(shí)現(xiàn)對β?葡萄糖醛酸苷酶處置藥物能力的評估，以及β?葡萄糖醛酸苷酶抑制劑的開發(fā)篩選。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種基于萘酰亞胺的β-葡萄糖醛酸苷酶的熒光探針及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

β-葡萄糖醛酸苷酶 (β-glucuronidase) 是一種自然界廣泛存在的水解酶，能夠催化各種類型的 β-葡萄糖醛酸酸苷鍵的水解反應(yīng)，同時(shí)釋放出 β-葡萄糖醛酸和相應(yīng)的配基。目前，已在動(dòng)物（人、猴、狗、鼠等）、植物（黃芪、擬南芥、煙草、水稻、玉米等）以及微生物（葡萄球菌、乳酸菌、瘤胃球菌等細(xì)菌，青霉菌、曲霉菌、酵母菌等）中發(fā)現(xiàn)β-葡萄糖醛酸苷酶的存在。在動(dòng)物和人體內(nèi)中，該酶幾乎存在于所有的組織和體液中，定位于這些器官細(xì)胞的溶酶體和微粒體中，是一種嗜酸性溶酶體酶，參與內(nèi)源性物質(zhì)的代謝，例如類固醇類激素和膽紅素的代謝。此外，在天然產(chǎn)物中廣泛存在的糖苷類化合物，例如甘草酸等天然產(chǎn)物，也需要經(jīng)β-葡萄糖醛酸苷酶水解為苷元形式，才能被機(jī)體吸收利用。β-葡萄糖醛酸苷酶在高等植物、微生物中也有存在，參與植物生合成和微生物酵解等生理活動(dòng)。

近年來，人們對于體內(nèi)的 β-葡萄糖醛酸苷酶的研究日益廣泛。

β-葡萄糖醛酸苷酶的活性常用底物的消耗或產(chǎn)物的生成評價(jià)，而顯色/熒光底物/產(chǎn)物因其檢測方便、靈敏度高而廣泛應(yīng)用于酶活性的評價(jià)中。目前，已報(bào)道的β-葡萄糖醛酸苷酶的熒光底物有5-溴-4-氯-3-吲哚-β-葡糖苷酸脂、羥基喹啉-β-葡糖苷酸苷、對硝基苯酚基-β-葡萄糖酸苷、4-甲基傘形酮-β-葡糖苷酸等，分別利用吲哚、羥基喹啉、對硝基酚、4-甲基傘形酮等有色產(chǎn)物作為酶活檢測指標(biāo)。然而，這些底物普遍存在兩個(gè)問題。首先是選擇性不高，水解反應(yīng)不僅被β-葡萄糖醛酸苷酶水解，還可被其他酶例如酯酶等水解；其次，采用顯色反應(yīng)或香豆素類熒光存在較大的基底干擾，例如生物樣品等復(fù)雜體系本身帶有顏色或存在波長相近的熒光。因此，開發(fā)選擇性高、干擾低的β-葡萄糖醛酸苷酶的特異性熒光探針底物，具有重要的應(yīng)用價(jià)值。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提供一種基于萘酰亞胺的β-葡萄糖醛酸苷酶的熒光探針及其應(yīng)用，該特異性熒光探針底物可被β-葡萄糖醛酸苷酶選擇性的水解，生成熒光屬性明顯改變的水解產(chǎn)物，可被熒光檢測器檢測。利用該探針反應(yīng)可對多種生物體系中β-葡萄糖醛酸苷酶的分布和功能進(jìn)行定量評價(jià)，并可用于β-葡萄糖醛酸苷酶抑制劑的篩選。

本發(fā)明公開的β-葡萄糖醛酸苷酶的特異性熒光探針底物，分別為N-正丁基-4-O-β-D-葡萄糖醛酸-1,8-萘酰亞胺（簡寫為HN-1-glu）。

HN-1-glu