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[發(fā)明專利]一種基于萘酰亞胺的β-葡萄糖醛酸苷酶的熒光探針及其應(yīng)用有效

專利信息
申請(qǐng)?zhí)枺?/td> 201710877084.0 申請(qǐng)日: 2017-09-25
公開(公告)號(hào): CN107602643B 公開(公告)日: 2020-06-30
發(fā)明(設(shè)計(jì))人: 王錚;崔京南;馮磊;崔文光;馬驍馳;田象閣 申請(qǐng)(專利權(quán))人: 王錚;崔京南
主分類號(hào): C07H17/02 分類號(hào): C07H17/02;C09K11/06;G01N21/64;G01N33/573
代理公司: 暫無信息 代理人: 暫無信息
地址: 210000 江蘇省南京市建鄴*** 國(guó)省代碼: 江蘇;32
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摘要:
搜索關(guān)鍵詞: 一種 基于 亞胺 葡萄 糖醛酸 熒光 探針 及其 應(yīng)用
【權(quán)利要求書】:

1.一種基于萘酰亞胺的β-葡萄糖醛酸苷酶的熒光探針的非診斷非治療目的的應(yīng)用,其特征在于:該探針底物可被β-葡萄糖醛酸苷酶特異性催化,使探針底物中的葡糖醛酸苷鍵加水分解,探針為N-正丁基-4-O-β-D-葡萄糖醛酸-1,8-萘酰亞胺,其結(jié)構(gòu)式如式(1)所示,

式(1)

該探針的應(yīng)用為:采用N-正丁基-4-O-β-D-葡萄糖醛酸-1,8-萘酰亞胺作為β-葡萄糖醛酸苷酶的特異性底物,進(jìn)行水解反應(yīng),通過定量檢測(cè)單位時(shí)間內(nèi)的苷元產(chǎn)物的生成率來定量測(cè)定β-葡萄糖醛酸苷酶的活性;反應(yīng)條件為:底物濃度介于1/10~10 Km之間;孵育體系pH為6.0;反應(yīng)溫度介于20~60℃之間,底物消除率或產(chǎn)物的生成率低于20%;該探針底物的酶解產(chǎn)物具有熒光,酶解產(chǎn)物的檢測(cè)條件為激發(fā)波長(zhǎng)450 nm,最大發(fā)射波長(zhǎng)為556 nm。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于萘酰亞胺的β-葡萄糖醛酸苷酶的熒光探針的非診斷非治療目的的應(yīng)用,其特征在于:該探針底物還可用于β-葡萄糖醛酸苷酶抑制劑的快速篩選及抑制能力的定量評(píng)價(jià):

(1)預(yù)先準(zhǔn)備99 μL 體外代謝反應(yīng)體系,包括pH 6.0的50 mM磷酸鹽緩沖液、0.1 mg/mL的β-葡萄糖醛酸苷酶,以及終濃度分別為50, 200, 600 μM的抑制劑洛哌丁胺、α-半乳糖、雙對(duì)硝基苯基磷酸酯、黃芩苷和表兒茶素沒食子酸酯于37℃條件下震蕩預(yù)孵3分鐘;

(2)向反應(yīng)體系中加入1 μL濃度為1 mM的N-正丁基-4-O-β-D-葡萄糖醛酸-1,8-萘酰亞胺起始反應(yīng);

(3)60分鐘后,加入50 μL冰乙腈,劇烈震蕩后,終止反應(yīng);

(4)用高速冷凍離心機(jī)在4℃、20000×g的條件下,高速離心20分鐘后,取上清液,進(jìn)行熒光檢測(cè),Ex=450 nm,Em=556 nm;結(jié)果顯示,黃芩苷呈劑量依賴的抑制β-葡萄糖醛酸苷酶的催化反應(yīng)。

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