[發明專利]五指毛桃的RPA快速鑒定方法及鑒定用RPA引物有效
| 申請號： | 201710659952.8 | 申請日： | 2017-08-04 |
| 公開（公告）號： | CN107227375B | 公開（公告）日： | 2020-04-14 |
| 發明（設計）人： | 田恩偉;晁志;劉倩倩;蔡炫;葉浩婷;李放 | 申請（專利權）人： | 南方醫科大學 |
| 主分類號： | C12Q1/6895 | 分類號： | C12Q1/6895;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京市誠輝律師事務所 11430 | 代理人： | 范盈 |
| 地址： | 510515 廣東*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 五指毛桃 rpa 快速 鑒定 方法 引物 | ||
1.一種五指毛桃鑒定的RPA特異性引物組合物，其序列為
上游引物RPA-ITS-F:5'-TCAAGGAAAGACAACGAGACGATCCCAGCC-3'SEQ ID No.1
下游引物RPA-ITS-R:5'-CGACTACCTGTTGCCAAGACGACGTGACAG-3'SEQ ID No.2
擴增產物片段大小為412bp。
2.一種五指毛桃鑒定方法，其包括如下步驟：
將待測樣品以五指毛桃鑒定的RPA特異性引物組合物進行重組酶聚合酶擴增，檢測擴增產物；
所述五指毛桃鑒定的RPA特異性引物組合物，其序列為上游引物RPA-ITS-F:5'-TCAAGGAAAGACAACGAGACGATCCCAGCC-3'SEQ ID No.1
下游引物RPA-ITS-R:5'-CGACTACCTGTTGCCAAGACGACGTGACAG-3'SEQ ID No.2。
3.根據權利要求2所述的鑒定方法，其中，待測樣品的制備方法為粉碎樣品后加入提取緩沖液混勻；煮沸后取出，加入0.1mol/L Tris–HCl，離心后取上清得到待測樣品。
4.根據權利要求2所述的鑒定方法，其中，擴增反應的溫度為27℃-52℃。
5.根據權利要求4所述的鑒定方法，其中，擴增反應的溫度為37℃-42℃。
6.根據權利要求2所述的鑒定方法，其中，擴增反應的時間為15分鐘以上。
7.根據權利要求2所述的鑒定方法，其中，待測樣品的臨界最低濃度為10-2ng/μL。
8.一種檢測五指毛桃的試劑盒，其包含五指毛桃鑒定的RPA特異性引物組合物，所述五指毛桃鑒定的RPA特異性引物組合物序列為上游引物RPA-ITS-F:5'-TCAAGGAAAGACAACGAGACGATCCCAGCC-3'SEQ ID No.1
下游引物RPA-ITS-R:5'-CGACTACCTGTTGCCAAGACGACGTGACAG-3'SEQ ID No.2。
9.權利要求1所述的五指毛桃鑒定的RPA特異性引物組合物在制備鑒定五指毛桃的試劑盒中的用途。
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