本發(fā)明提供月季花瓣中類胡蘿卜素的高效提取及測定方法，包括步驟：a制備類胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)品溶液；b制備類胡蘿卜素待測樣品溶液；c高效液相色譜分析；d液質(zhì)聯(lián)用分析，獲得月季花瓣中類胡蘿卜素的質(zhì)譜信息；e根據(jù)保留時間、紫外可見吸收光譜圖、質(zhì)譜圖、類胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)品和和文獻資料對月季花瓣樣品中類胡蘿卜素的結(jié)構(gòu)進行鑒定；f根據(jù)類胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)品的線性回歸方程，對月季花瓣樣品中的類胡蘿卜素進行定量分析。本發(fā)明方法樣品用量少、提取效率高、結(jié)果重復(fù)性好、數(shù)據(jù)準(zhǔn)確可靠，是一種適合月季花瓣類胡蘿卜素提取以及定性、定量分析的優(yōu)良方法。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及類胡蘿卜素的提取方法，具體地說，涉及月季花瓣中類胡蘿卜素的高效提取及測定方法。

背景技術(shù)

月季(Rosa spp.)是一種具有重要經(jīng)濟價值的觀賞植物，花色是其最重要的觀賞性狀之一。黃色月季是月季育種史上的一大奇跡，胡蘿卜素是賦予月季黃色和橙色的重要物質(zhì)。

類胡蘿卜素是一種由多個異戊二烯骨架串聯(lián)而成的萜類化合物 (多數(shù)為C40)。由于存在共軛體系，因此在可見光下類胡蘿卜素呈現(xiàn)黃色、橙色或紅色。對植物而言，類胡蘿卜素具有核心的生物學(xué)功能，例如在光合作用中對光能傳遞、光保護及自由基清除等方面發(fā)揮重要作用，同時胡蘿卜素是合成植物激素脫落酸和獨腳金內(nèi)酯的前體物質(zhì)。并且類胡蘿卜素可賦予植物花朵、果實及種子各種顏色，對于吸引傳粉者、傳播種子等具有重要作用。對人類而言，類胡蘿卜素是合成維生素A的前體，是一種優(yōu)良的天然色素，同時在抗氧化、提高免疫力、保護視力及防癌等方面具有顯著功效。月季長勢健壯，適應(yīng)性廣、四季開花，因此月季花瓣有望成為胡蘿卜素制備的重要材料。建立月季花瓣中類胡蘿卜素提取及測定方法，對黃色月季育種和黃色月季中類胡蘿卜素的提取利用具有重大意義。

前期檢索結(jié)果顯示，現(xiàn)有研究多數(shù)關(guān)注月季果實中類胡蘿卜素的提取和測定，且存在操作步驟繁瑣、樣品損耗大、提取效率低等缺點。 Eugster等(1991)利用經(jīng)典的紙層析技術(shù)對月季花瓣中的胡蘿卜素進行分離鑒定，此方法不僅類胡蘿卜素降解較多而且分離效果較差。近幾年，Hodisan等(1997)、Andersson等(2011)和Horváth等(2012) 先后利用有機溶劑提取薔薇果實中類胡蘿卜素，類胡蘿卜素提取液不經(jīng)皂化直接用C18色譜柱進行高效液相色譜分析，其中Horváth分離出的類胡蘿卜素種類最多，但是也僅有9種。因此，急需建立一種月季花瓣中類胡蘿卜素的高效提取和測定方法。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供月季花瓣中類胡蘿卜素的高效提取及測定方法。

為了實現(xiàn)本發(fā)明目的，本發(fā)明提供的月季花瓣中類胡蘿卜素的高效提取及測定方法，包括以下步驟：

S1、稱取類胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)品，用甲醇-甲基叔丁基醚溶液溶解，制備類胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)品溶液；其中，所述甲醇-甲基叔丁基醚溶液中甲醇和甲基叔丁基醚的體積比為1:1；

S2、將月季花瓣樣品在液氮中迅速研磨，依次用甲醇、正己烷和正己烷-乙醚溶液振蕩提取；收集有機相，揮干，得到胡蘿卜素干粉；向胡蘿卜素干粉中加入含有6％KOH的甲醇溶液，在黑暗條件下進行皂化反應(yīng)；向皂化后的樣品中加入10％NaCl水溶液，震蕩后靜置，然后加入正己烷-乙醚溶液振蕩提取1～2次，直到殘渣為白色，收集有機相，揮干，得到皂化后的胡蘿卜素干粉樣品；其中，所述正己烷- 乙醚溶液中正己烷和乙醚的體積比為3:1；

S3、高效液相色譜分析(HPLC)；

S4、液質(zhì)聯(lián)用分析(LC-MS)，獲得月季花瓣中類胡蘿卜素的質(zhì)譜信息；

S5、根據(jù)保留時間、紫外可見吸收光譜圖、質(zhì)譜圖、類胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)品和和文獻資料對月季花瓣樣品中類胡蘿卜素的結(jié)構(gòu)進行鑒定；

S6、根據(jù)類胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)品的線性回歸方程，對月季花瓣樣品中的類胡蘿卜素進行定量分析。