[發(fā)明專利]月季花瓣中類胡蘿卜素的高效提取及測定方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201710546859.6 | 申請日： | 2017-07-06 |
| 公開（公告）號： | CN107561171B | 公開（公告）日： | 2020-02-21 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 張啟翔;萬會花;韓瑜;程堂仁;王佳;于超;潘會堂;李生;蔡勇;喬亞西;王李亮 | 申請（專利權(quán)）人： | 北京林業(yè)大學(xué);江蘇蘇北花卉股份有限公司 |
| 主分類號： | G01N30/02 | 分類號： | G01N30/02;G01N30/06 |
| 代理公司： | 北京路浩知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11002 | 代理人： | 王文君;陳征 |
| 地址： | 100083 *** | 國省代碼： | 北京;11 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 月季 花瓣 類胡蘿卜素 高效 提取 測定 方法 | ||
1.月季花瓣中類胡蘿卜素的高效提取及測定方法，其特征在于，包括以下步驟：
S1、稱取類胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)品，用甲醇-甲基叔丁基醚溶液溶解，制備類胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)品溶液；其中，所述甲醇-甲基叔丁基醚溶液中甲醇和甲基叔丁基醚的體積比為1:1；
S2、將月季花瓣樣品在液氮中迅速研磨，依次用甲醇、正己烷和正己烷-乙醚溶液振蕩提取；收集有機(jī)相，揮干，得到類胡蘿卜素干粉；向類胡蘿卜素干粉中加入含有6％KOH的甲醇溶液，在黑暗條件下進(jìn)行皂化反應(yīng)；向皂化后的樣品中加入10％NaCl水溶液，震蕩后靜置，然后加入正己烷-乙醚溶液振蕩提取，直到殘渣為白色，收集有機(jī)相，揮干，得到皂化后的類胡蘿卜素干粉樣品；其中，所述正己烷-乙醚溶液中正己烷和乙醚的體積比為3:1；
S3、高效液相色譜分析；
S4、液質(zhì)聯(lián)用分析，獲得月季花瓣中類胡蘿卜素的質(zhì)譜信息；
S5、根據(jù)保留時間、紫外可見吸收光譜圖、質(zhì)譜圖、類胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)品和和文獻(xiàn)資料對月季花瓣樣品中類胡蘿卜素的結(jié)構(gòu)進(jìn)行鑒定；
S6、根據(jù)類胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)品的線性回歸方程，對月季花瓣樣品中的類胡蘿卜素進(jìn)行定量分析。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，各步操作中使用的有機(jī)試劑中均含有0.1％BHT，整個提取過程均在避光或黃光以及溫度不超過23℃的條件下進(jìn)行。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟S2具體為：
(1)將月季花瓣樣品在液氮中迅速研磨成粉末，稱取0.2-0.3g樣品，加入4ml甲醇，置于振蕩培養(yǎng)箱中振蕩提取20min；
(2)向(1)所得體系中加入4ml正己烷，置于振蕩培養(yǎng)箱中振蕩提取20-30min；
(3)向(2)所得體系中加入10％NaCl水溶液2ml，手動搖晃30s，靜置分層，收集上層有機(jī)相；
(4)向(3)所得下層溶液中加入2ml正己烷-乙醚溶液，置于振蕩培養(yǎng)箱中振蕩提取20-30min，靜置分層，收集上層有機(jī)相；用正己烷-乙醚溶液重復(fù)提取，直到殘渣為白色；
(5)將(3)和(4)收集的上層有機(jī)相混合，用氮吹儀吹干，得到類胡蘿卜素干粉；
(6)向類胡蘿卜素干粉中加入含有6％KOH的甲醇溶液1ml，置于振蕩培養(yǎng)箱中振蕩12h，進(jìn)行皂化反應(yīng)；
(7)向皂化后的樣品中加入10％NaCl水溶液1ml，震蕩后靜置，然后加入1ml正己烷-乙醚溶液，置于振蕩培養(yǎng)箱中振蕩提取1h，取出后靜置分層取上清；
(8)向(7)的上清中加入0.5ml正己烷-乙醚溶液，置于振蕩培養(yǎng)箱中振蕩提取1h，取出后靜置分層取上清；用正己烷-乙醚溶液重復(fù)提取，直到殘渣為白色；
(9)收集(8)的有機(jī)相用真空離心濃縮儀濃縮至干燥，將皂化后的類胡蘿卜素干粉置于棕色離心管中，于-80℃保存。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟S3中先將皂化后的類胡蘿卜素干粉樣品用甲醇-甲基叔丁基醚溶液溶解，然后用0.22μm微孔濾膜過濾，裝于2ml安捷倫上樣瓶中用于高效液相色譜檢測分析；其中，所述甲醇-甲基叔丁基醚溶液中甲醇和甲基叔丁基醚的體積比為1:1。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟S3中使用的色譜柱為色譜柱為C30，規(guī)格250mm×4.6mm，5μm；流動相為：A，含0.1％BHT的甲醇；B，含0.1％BHT的甲醇-甲基叔丁基醚；C，超純水；梯度洗脫，流速為1ml/min，進(jìn)樣量20μl，柱溫箱溫度25℃，200-600nm全波長掃描；
梯度洗脫條件為：0-2min，95％A+5％C，10min，95％A+3％B+2％C；21min，95％A+5％B；27min，90％A+10％B；37min，70％A+30％B；40min，50％A+50％B；40.01-50min，95％A+5％C。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，步驟S3中提取450nm下的液相色譜圖，同時得到每個峰對應(yīng)的200-600nm紫外可見吸收光譜圖。
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