技術領域

本發明屬于毒品檢測領域，尤其是批量樣本檢測領域，涉及一種基于生物膜干涉技術的搖頭丸檢測方法。

背景技術

搖頭丸一般以MDMA(3,4－亞甲基二氧甲基苯丙胺)為主要有效成分。吸毒者食用搖頭丸后，大腦皮層興奮，在沒有音樂的時候，頭會輕微地晃動，有一種疲憊、欲睡的感覺。但當服用者受到音樂的刺激時，就會隨著音樂的節拍不由自主地手舞足蹈、瘋狂地搖頭，音樂節奏越強烈，頭晃動得越厲害，感覺越舒服，甚至有搖斷了脖子的記錄，故此被稱之為“搖頭丸”。長期濫用機體極易產生依賴，其機制可能為大量攝入后導致內源性神經遞質耗竭和生成障礙，加之多巴胺受體和腎上腺素受體對其產生耐受性和低調節反應，致使需不斷增加用量才能產生有效沖動。初服用時有口干、精神緊張等感覺，幾次后即可成癮，并感到心情愉悅，思維敏捷，精力旺盛。成癮者戒斷時可出現血壓下降，心律失常，情緒激動，抽搐、譫妄等癥狀，而難以忍受，導致戒斷困難。

目前搖頭丸的檢測方法主要為膠體金法和色譜法。膠體金試紙條雖然檢測方便，但其以吸毒人員尿液為檢測對象，其靈敏度只有幾百ng/ml，且每個試紙條每次只能檢測一個人。色譜法雖然靈敏度高，但前處理過程時間較長，需要專門技術人員和大規模昂貴儀器。而本技術以其高靈敏度，可實現對待檢人員的唾液進行毒品檢測，從而避免因取尿對客體隱私的侵犯，并可實現在幾分鐘內進行80個樣品的高通量檢測。

生物膜干涉技術生物膜干涉技術(Bio-1ayer interferometry，BLI)是一種實時、無需標記的快速檢測技術，其原理是當生物分子結合到傳感器表面形成一層生物膜層，該生物膜層對透過傳感器的光的波形造成干涉現象。干涉現象以相位移動的方式被檢測，可以檢測結合到傳感器分子數量的變化。BLI技術已經成功應用于蛋白質分子間相互作用的檢測，在小分子檢測領域也有進一步研究。

發明內容

本發明的目的是提供一種快速、高通量的檢測待檢人員唾液中搖頭丸含量的技術。所述檢測方法取樣方便，操作簡單，檢測快速，靈敏度高，在批量樣品檢測場合具有重要的應用價值。

本發明的目的由以下技術方案實現：

一種基于生物膜干涉技術的搖頭丸檢測方法，包括如下步驟：

步驟(1)：膠體金的制備。將在4℃預冷的1％HAuCl₄水溶液1mL,0.2mol/LK2CO31.5mL、雙蒸水25mL混勻；在攪拌下加入1mL 0.7％抗壞血酸水溶液，立即呈現紫紅色；加雙蒸水至100mL，加熱至溶液變為透明紅色為止；冷卻至室溫后，采用分光光度計檢測510-525nm處的吸光度；

所述的上述過程都是避光的；本方法所述的膠體金的粒徑為10-15nm，在517nm波長下有最大吸光度值；

步驟(2)：金標抗體的制備。取一定體積的膠體金溶液,用碳酸鉀溶液調節PH至7.2-7.4，室溫攪拌10-20min；按100:1-2的體積比加入1mg/mL的搖頭丸單克隆抗體,室溫攪拌20-30min；加入質量分數為10％的BSA溶液使其終濃度為1％；室溫攪拌20-30min；4-8℃，12000rpm離心20-30min；棄上清液，留沉淀；沉淀用等體積的PBS緩沖液溶解，得到搖頭丸金標抗體溶液；

所述的膠體金溶液為步驟(1)檢驗合格的；碳酸鉀溶液濃度為0.2M；搖頭丸單克隆抗體為購買的鼠源單克隆抗體；BSA(牛血清白蛋白)溶液封閉抗體未結合的位置；PBS緩沖液的pH為7.4；

步驟(3)：光纖生物傳感器的制備。將APS光纖傳感器末端沒入搖頭丸-BSA溶液中，室溫靜置20-30min；再將光纖生物傳感器沒入10％的BSA溶液中，室溫靜置20-30min；再將光纖生物傳感器沒入蔗糖溶液中，室溫靜置20-30min；室溫晾干，置于2～8℃干燥保存；

所述的APS光纖傳感器是用無水乙醇配置的0.5M的APS(Aminopropyls-ilane,氨基丙基硅烷)浸泡光纖探頭12小時并干燥后制得的，處理后的光纖探頭表面能通過蛋白的氨基固定蛋白分子；搖頭丸-BSA為搖頭丸完全抗原，即在BSA表面偶聯了搖頭丸分子，可購買獲得；搖頭丸-BSA溶液濃度為50-100μg/mL,蔗糖溶液濃度為15％；

步驟(4)：待測樣品準備。用棉簽沾取待檢人員下牙床內的唾液后，將棉簽插入含有0.5-1mL溶液的1.5mL的EP管中并旋轉混勻后棄掉棉簽；EP管內的溶液待用；

所述的棉簽為醫用一次性棉簽，EP管內的溶液為步驟(2)制得的搖頭丸金標抗體溶液，EP管內的溶液作為后續檢測的樣品；