[發明專利]一種基于生物膜干涉技術的搖頭丸檢測方法在審
| 申請號: | 201710543619.0 | 申請日: | 2017-07-05 |
| 公開(公告)號: | CN107389938A | 公開(公告)日: | 2017-11-24 |
| 發明(設計)人: | 王學軍;王繼業;姚偉宣;呂云平;孟凡偉 | 申請(專利權)人: | 浙江警察學院 |
| 主分類號: | G01N33/577 | 分類號: | G01N33/577;G01N33/532 |
| 代理公司: | 杭州君度專利代理事務所(特殊普通合伙)33240 | 代理人: | 黃前澤 |
| 地址: | 310000*** | 國省代碼: | 浙江;33 |
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| 摘要: | |||
| 搜索關鍵詞: | 一種 基于 生物膜 干涉 技術 搖頭丸 檢測 方法 | ||
1.一種基于生物膜干涉技術的搖頭丸檢測方法,其特征在于該方法包括以下步驟:
步驟(1)、金標抗體的制備
將膠體金調節PH至7.2-7.4,室溫攪拌10-20min;按100:1-2的體積比加入1mg/mL的搖頭丸單克隆抗體,室溫攪拌20-30min;加入質量分數為10%的BSA溶液使其終濃度為1%,室溫攪拌20-30min;然后置于4-8℃下離心,沉淀用等體積的PBS緩沖液溶解,得到搖頭丸金標抗體溶液;
所述的膠體金粒徑為10-15nm,在517nm波長下有最大吸光度值;
步驟(2)、待測樣品準備
用棉簽沾取待檢人員下牙床內的唾液后,置于0.5-1mL搖頭丸金標抗體溶液中,旋轉混勻后獲得所需的待測樣品溶液;
步驟(3)、樣品檢測
采用ForteBio Octet Red生物分子相互作用儀對步驟(2)待測樣品溶液進行檢測,檢測過程為:
①將再生平衡后的APS光纖生物傳感器的檢測端浸沒在步驟(2)待測樣品溶液中60-100s進行檢測;
②檢測后的光纖傳感器的檢測端再次進行再生平衡;
③將檢測結果代入搖頭丸標準曲線中,獲得待測樣品中搖頭丸的濃度。
2.如權利要求1所述的一種基于生物膜干涉技術的搖頭丸檢測方法,其特征在于所述的搖頭丸標準曲線采用ForteBio Octet Red生物分子相互作用儀對梯度標準品溶液進行檢測,繪制標準曲線,具體過程如下:
①多個APS光纖生物傳感器的檢測端浸沒在PBS緩沖液中30-100s進行平衡;
②平衡后的多個光纖傳感器的檢測端分別浸沒在0ng/mL、1ng/mL、10ng/mL、50ng/mL、100ng/mL、200ng/mL、500ng/mL、1000ng/mL的搖頭丸標準品溶液中60-100s進行梯度標準品的檢測,根據檢測結果,繪制標準曲線,再對標準品濃度做10為底的對數轉換,得出標準品濃度和檢測信號之間的函數關系,即搖頭丸標準曲線。
3.如權利要求1所述的一種基于生物膜干涉技術的搖頭丸檢測方法,其特征在于APS光纖傳感器再生平衡過程是將APS光纖生物傳感器的檢測端浸沒在甘氨酸-鹽酸緩沖液中30-100s進行再生;再生后的光纖傳感器的檢測端浸沒在PBS緩沖液中30-100s進行平衡。
4.如權利要求1或2或3所述的一種基于生物膜干涉技術的搖頭丸檢測方法,其特征在于所述的APS光纖生物傳感器的制備過程如下:
1)采用0.5M APS乙醇溶液浸泡普通空白的光纖生物傳感器檢測端12小時并干燥;其中處理后傳感器的檢測端表面能通過蛋白的氨基固定蛋白分子;
2)將上述處理后傳感器的檢測端浸沒在搖頭丸-BSA溶液中,室溫靜置20-30min;
3)將上述處理后傳感器的檢測端浸沒在質量含量為10%的BSA溶液中,室溫靜置20-30min;
4)將上述處理后傳感器的檢測端浸沒在蔗糖溶液中,室溫靜置20-30min;
5)室溫晾干,置于2~8℃干燥保存;
搖頭丸-BSA為搖頭丸完全抗原,即在BSA表面偶聯了搖頭丸分子。
5.如權利要求4所述的一種基于生物膜干涉技術的搖頭丸檢測方法,其特征在于搖頭丸-BSA溶液濃度為50-100μg/mL。
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