技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于菊花栽培和工業(yè)提取花青素苷技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種利用pH示差法測(cè)定紫色菊花花青素苷含量從而確定最佳采收期的方法。

背景技術(shù)

菊花，多年生草本植物，其頭狀花序色澤艷麗，富含黃酮類化合物、三萜類化合物和揮發(fā)油等多種有效成分，具有重要的觀賞、食用、茶用和藥用價(jià)值。花青素苷，屬黃酮類化合物，是植物主要的呈色物質(zhì)，能夠清除自由基，具有抗氧化作用，在食品、保健、醫(yī)藥和化妝品領(lǐng)域的應(yīng)用日趨受到人們的關(guān)注。在所有色系的菊花品種中，紫色系菊花花瓣中花青素苷含量最高，從紫色菊花花瓣中工業(yè)化提取花青素苷對(duì)于延伸菊花產(chǎn)業(yè)鏈，提高菊花產(chǎn)業(yè)的總效益具有重要的意義。

有關(guān)紫色菊花花瓣中花青素苷的研究，目前主要集中在花青素苷的提取方面，有關(guān)其花青素苷的含量檢測(cè)方法的研究目前報(bào)道較少。已有紫色菊花花青素苷的檢測(cè)，常用單一pH下的分光光度法和高效液相色譜法兩種方法進(jìn)行，由于菊花花青素提取過程中所得到的浸提液成分復(fù)雜，難免會(huì)有干擾物影響單一pH下的分光光度法對(duì)花青素苷含量的檢測(cè)；用高效液相色譜法檢測(cè)花青素苷的含量，則存在所需儀器設(shè)備較為昂貴的局限性。pH示差法能夠有效減少干擾物對(duì)花青素苷含量檢測(cè)的影響，且設(shè)備費(fèi)用投入較小。目前，使用pH示差法檢測(cè)花青素苷含量的研究逐漸增多，但在紫色菊花花青素苷檢測(cè)方面目前報(bào)道較少，有關(guān)檢測(cè)方法中的相關(guān)參數(shù)目前仍不清楚。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明解決的技術(shù)問題是提供了一種利用pH示差法測(cè)定紫色菊花花青素苷含量從而確定最佳采收期的方法，該方法利用pH示差法確定檢測(cè)紫色菊花花青素苷含量的相關(guān)參數(shù)，對(duì)檢測(cè)波長、pH和平衡時(shí)間進(jìn)行篩選，通過測(cè)定花青素苷含量及計(jì)算單花序花青素苷含量的變化確定出紫色菊花的最佳采收時(shí)期，為工業(yè)提取花青素苷提供技術(shù)支持。

本發(fā)明為解決上述技術(shù)問題采用如下技術(shù)方案，一種利用pH示差法測(cè)定紫色菊花花青素苷含量從而確定最佳采收期的方法，其特征在于具體步驟為：

（1）紫色菊花樣品的采集；

（2）花青素苷浸提液的制備；

（3）紫色菊花樣品中花青素苷的浸提；

（4）pH示差法條件參數(shù)檢測(cè)波長、pH及平衡時(shí)間的確定；

（5）紫色菊花花青素苷含量的測(cè)定；

（6）確定紫色菊花最佳采收期。

進(jìn)一步優(yōu)選，步驟（1）的具體過程為：從紫色菊花開花進(jìn)程選取4個(gè)取樣時(shí)期分別取菊花頭狀花序，將菊花頭狀花序鼓風(fēng)干燥72h后準(zhǔn)確稱取0.2g菊花花瓣樣品作為待測(cè)樣品。

進(jìn)一步優(yōu)選，步驟（2）的具體過程為：將體積分?jǐn)?shù)為80%的乙醇溶液與摩爾濃度為0.1mol/L的鹽酸溶液以1:2的體積比混合均勻配制成花青素苷浸提液。

進(jìn)一步優(yōu)選，步驟（3）的具體過程為：將準(zhǔn)確稱取的0.2g待測(cè)樣品剪至1cm置于10mL的離心管中，再添加10mL花青素苷浸提液，在室溫下浸提24h后濾去花瓣，花青素苷濾液用于花青素苷含量的測(cè)定，浸提過程中用雙層黑色塑料袋遮光以防止花青素苷的降解，并且每隔2-3h充分?jǐn)嚢?次。

進(jìn)一步優(yōu)選，步驟（4）的具體過程為：

檢測(cè)波長的確定，利用紫外-可見分光光度計(jì)對(duì)矢車菊色素-3-O-葡萄糖苷標(biāo)準(zhǔn)品和花青素苷濾液在200-800nm范圍內(nèi)進(jìn)行全波段掃描，在可見光區(qū)內(nèi)，矢車菊色素-3-O-葡萄糖苷的最大吸收峰在511nm附近，花青素苷濾液中花青素苷的最大吸收峰在515nm附近，二者吸收峰相近，因此，確定515nm為花青素苷濾液中花青素苷的最大吸收波長，參考矢車菊色素-3-O-葡萄糖苷中的相關(guān)參數(shù)來計(jì)算花青素苷濾液中花青素苷的含量；

pH的確定，先將花青素苷濾液稀釋4倍，再分別準(zhǔn)確量取稀釋后的花青素苷濾液1mL于9個(gè)試管中，然后分別加入pH為0.5、1.0、1.5、2.0、3.0、4.0、4.5、5.0、6.0的緩沖液9mL，以浸提液調(diào)零，測(cè)定最大吸收波長下的吸光度，花青素苷濾液中花青素苷在pH1.0和pH4.5處的吸光度值的差值最大，并且在此兩處的pH附近吸光度值變化較小，所以選擇在pH1.0和pH4.5條件下測(cè)定花青素苷濾液中的花青素苷含量；