[發明專利]一種利用pH示差法測定紫色菊花花青素苷含量從而確定最佳采收期的方法在審
| 申請號: | 201710425672.0 | 申請日: | 2017-06-08 |
| 公開(公告)號: | CN107247030A | 公開(公告)日: | 2017-10-13 |
| 發明(設計)人: | 劉海英;高遠;邢晨濤;陸順麗;李靜圓;李燕萍;易茜 | 申請(專利權)人: | 河南師范大學 |
| 主分類號: | G01N21/31 | 分類號: | G01N21/31 |
| 代理公司: | 新鄉市平原智匯知識產權代理事務所(普通合伙)41139 | 代理人: | 路寬 |
| 地址: | 453007 *** | 國省代碼: | 河南;41 |
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| 摘要: | |||
| 搜索關鍵詞: | 一種 利用 ph 示差法 測定 紫色 菊花 花青素 含量 從而 確定 最佳 采收 方法 | ||
1.一種利用pH示差法測定紫色菊花花青素苷含量從而確定最佳采收期的方法,其特征在于具體步驟為:
(1)紫色菊花樣品的采集;
(2)花青素苷浸提液的制備;
(3)紫色菊花樣品中花青素苷的浸提;
(4)pH示差法條件參數檢測波長、pH及平衡時間的確定;
(5)紫色菊花花青素苷含量的測定;
(6)確定紫色菊花最佳采收期。
2.根據權利要求1所述的利用pH示差法測定紫色菊花花青素苷含量從而確定最佳采收期的方法,其特征在于步驟(1)的具體過程為:從紫色菊花開花進程選取4個取樣時期分別取菊花頭狀花序,將菊花頭狀花序鼓風干燥72h后準確稱取0.2g菊花花瓣樣品作為待測樣品。
3.根據權利要求1所述的利用pH示差法測定紫色菊花花青素苷含量從而確定最佳采收期的方法,其特征在于步驟(2)的具體過程為:將體積分數為80%的乙醇溶液與摩爾濃度為0.1mol/L的鹽酸溶液以1:2的體積比混合均勻配制成花青素苷浸提液。
4.根據權利要求1所述的利用pH示差法測定紫色菊花花青素苷含量從而確定最佳采收期的方法,其特征在于步驟(3)的具體過程為:將準確稱取的0.2g待測樣品剪至1cm置于10mL的離心管中,再添加10mL花青素苷浸提液,在室溫下浸提24h后濾去花瓣,花青素苷濾液用于花青素苷含量的測定,浸提過程中用雙層黑色塑料袋遮光以防止花青素苷的降解,并且每隔2-3h充分攪拌1次。
5.根據權利要求1所述的利用pH示差法測定紫色菊花花青素苷含量從而確定最佳采收期的方法,其特征在于步驟(4)的具體過程為:
檢測波長的確定,利用紫外-可見分光光度計對矢車菊色素-3-O-葡萄糖苷標準品和花青素苷濾液在200-800nm范圍內進行全波段掃描,在可見光區內,矢車菊色素-3-O-葡萄糖苷的最大吸收峰在511nm附近,花青素苷濾液中花青素苷的最大吸收峰在515nm附近,二者吸收峰相近,因此,確定515nm為花青素苷濾液中花青素苷的最大吸收波長,參考矢車菊色素-3-O-葡萄糖苷中的相關參數來計算花青素苷濾液中花青素苷的含量;
pH的確定,先將花青素苷濾液稀釋4倍,再分別準確量取稀釋后的花青素苷濾液1mL于9個試管中,然后分別加入pH為0.5、1.0、1.5、2.0、3.0、4.0、4.5、5.0、6.0的緩沖液9mL,以浸提液調零,測定最大吸收波長下的吸光度,花青素苷濾液中花青素苷在pH1.0和pH4.5處的吸光度值的差值最大,并且在此兩處的pH附近吸光度值變化較小,所以選擇在pH1.0和pH4.5條件下測定花青素苷濾液中的花青素苷含量;
平衡時間的確定,先將花青素苷濾液用浸提液稀釋4倍,然后取0.5mL稀釋后的花青素苷濾液加入4.5mL pH1.0的緩沖溶液,記錄樣品溶液與緩沖溶液混合后的時間,以浸提液調零,室溫下設置平衡時間在0-150 min,每隔15min測一次最大吸收波長下的吸光度,用同樣的方法測pH4.5的緩沖溶液下樣品的平衡時間,在pH1.0的緩沖溶液中,花青素苷的吸光度值隨時間的延長而逐漸增加,在60min后趨于穩定,在pH4.5的緩沖溶液中,花青素苷的吸光度值隨時間的延長而逐漸減少,在105min后趨于穩定,根據兩者的數據進行綜合考慮,平衡時間選擇為105min。
6.根據權利要求1所述的利用pH示差法測定紫色菊花花青素苷含量從而確定最佳采收期的方法,其特征在于步驟(5)的具體過程為:將花青素苷濾液用浸提液稀釋4倍,然后取1mL稀釋后的花青素苷濾液加入pH1.0的緩沖溶液定容至10mL,室溫下平衡105min,以浸提液調零,分別在最大吸收波長和700nm處測定吸光度值,然后用同樣的方法測定花青素苷濾液在pH4.5的緩沖溶液中最大吸收波長和700 nm處的吸光度值,然后代入公式(1)計算紫色菊花花青素苷含量,
X=?T*V*F*M*1000/ε*m(1)
其中X為紫色菊花花青素苷含量,mg/g;V為稀釋體積,L;F為稀釋倍數;M=449.2;ε=26900;?T為吸光度值,?T=(Aλmax-A700nm)ph1.0-(Aλmax-A700nm)ph4.5;m為樣品質量,g。
7.根據權利要求1所述的利用pH示差法測定紫色菊花花青素苷含量從而確定最佳采收期的方法,其特征在于步驟(6)的具體過程為:綜合所測得的紫色菊花花青素苷含量和計算得到的單花序花青素苷含量,篩選出紫色菊花花青素苷含量較高且不同取樣批次間均勻度高,同時單花序花青素苷含量也較高的采樣時期,從而確定紫色菊花的最佳采收時期。
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