[發明專利]同工酶共催化合成2,3-丁二醇的基因工程菌及其構建方法與應用有效
| 申請號： | 201710122238.5 | 申請日： | 2017-03-03 |
| 公開（公告）號： | CN107058365B | 公開（公告）日： | 2020-11-06 |
| 發明（設計）人： | 應漢杰;柳東;楊正嬌;沈曉寧;莊偉;朱晨杰;吳菁嵐;陳勇 | 申請（專利權）人： | 南京工業大學 |
| 主分類號： | C12N15/74 | 分類號： | C12N15/74;C12N1/21;C12P7/18;C12R1/145 |
| 代理公司： | 江蘇圣典律師事務所 32237 | 代理人： | 胡建華 |
| 地址： | 210000 江*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 工酶共 催化 合成 丁二醇 基因工程 及其 構建 方法 應用 | ||
1.同工酶共催化合成2,3-丁二醇的基因工程菌，其特征在于，將2,3-丁二醇脫氫酶同工酶基因串聯，然后將串聯的基因序列導入為丙酮丁醇梭菌CGMCC No.5234既得，所述串聯的基因序列包括如下三種基因序列：
(1) 枯草芽孢桿菌
(2) 枯草芽孢桿菌(
(3) 枯草芽孢桿菌
其中，所述乙酰乳酸脫羧酶基因
所述2,3-丁二醇脫氫酶基因
所述2,3-丁二醇脫氫酶基因
所述2,3-丁二醇脫氫酶基因
所述2,3-丁二醇脫氫酶基因
所述RBS序列如SEQ ID NO.70所示。
2.權利要求1所述同工酶共催化合成2,3-丁二醇的基因工程菌的構建方法，其特征在于，包括如下步驟：
（1）將SEQ ID NO.69、SEQ ID NO.65、SEQ ID NO.66所示的序列依次連接，每兩個基因序列之間插入SEQ ID NO.70所示的RBS序列；或者
SEQ ID NO.69、SEQ ID NO.65、SEQ ID NO.67所示的序列依次連接，每兩個基因序列之間插入SEQ ID NO.70所示的RBS序列；或者
SEQ ID NO.69、SEQ ID NO.65、SEQ ID NO.68所示的序列依次連接，每兩個基因序列之間插入SEQ ID NO.70所示的RBS序列；
得到同工酶基因片段；
（2）將步驟（1）得到的同工酶基因片段連接入表達載體中，得到重組質粒；
（3）將步驟（2）得到的重組質粒導入宿主細胞中，得到同工酶共催化合成2,3-丁二醇的基因工程菌，所述的宿主細胞為丙酮丁醇梭菌CGMCC No.5234。
3.權利要求1所述同工酶共催化合成2,3-丁二醇的基因工程菌在制備2,3-丁二醇中的應用。
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