[發(fā)明專(zhuān)利]一種用于轉(zhuǎn)化萊茵衣藻的AANAT基因植物雙元表達(dá)載體及其構(gòu)建方法有效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201710091283.9 | 申請(qǐng)日： | 2017-02-21 |
| 公開(kāi)（公告）號(hào)： | CN107326039B | 公開(kāi)（公告）日： | 2020-07-28 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 王英娟;張雨靖;高文英;楊澤熵;呂亞維 | 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人： | 西北大學(xué) |
| 主分類(lèi)號(hào)： | C12N15/79 | 分類(lèi)號(hào)： | C12N15/79;C12N15/66;C12N1/13;C12R1/89 |
| 代理公司： | 西安西達(dá)專(zhuān)利代理有限責(zé)任公司 61202 | 代理人： | 謝鋼 |
| 地址： | 710069 *** | 國(guó)省代碼： | 陜西;61 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 用于 轉(zhuǎn)化 萊茵衣藻 aanat 基因 植物 表達(dá) 載體 及其 構(gòu)建 方法 | ||
1.一種含有萊茵衣藻
（1）AANAT 基因?yàn)樾蛄斜碇?SEQ ID No.5 所示 DNA 分子，來(lái)自萊茵衣藻的cDNA序列，并在目的基因兩端增加
（2）以pUCK-AANAT質(zhì)粒為模板，PCR擴(kuò)增含有
（3）將重組質(zhì)粒pDBLe-AANAT與質(zhì)粒pRI101-AN使用BamH I和Kpn I 雙酶切，回收產(chǎn)物連接，熱激轉(zhuǎn)化DH5α的感受態(tài)細(xì)胞，Kana 50mg/L抗性的LB平板篩選培養(yǎng)，挑取單克隆擴(kuò)大培養(yǎng)，將陽(yáng)性重組質(zhì)粒命名為pRI101-AANAT。
2.權(quán)利要求 1 所述含有萊茵衣藻
（1）AANAT 基因?yàn)樾蛄斜碇?SEQ ID No.5 所示 DNA 分子，來(lái)自萊茵衣藻的cDNA序列，并在目的基因兩端增加
（2）以pUCK-AANAT質(zhì)粒為模板，PCR擴(kuò)增含有
（3）將重組質(zhì)粒pDBLe-AANAT與質(zhì)粒pRI101-AN使用BamH I和Kpn I 雙酶切，回收產(chǎn)物連接，熱激轉(zhuǎn)化DH5α的感受態(tài)細(xì)胞，Kana 50mg/L抗性的LB平板篩選培養(yǎng)，挑取單克隆擴(kuò)大培養(yǎng)，將陽(yáng)性重組質(zhì)粒命名為pRI101-AANAT。
3.權(quán)利要求 1 所述含有萊茵衣藻
（1）制備農(nóng)桿菌LBA4404感受態(tài)，然后將重組質(zhì)粒pRI101-AANAT通過(guò)電擊法轉(zhuǎn)化到農(nóng)桿菌LBA4404中，得到含有
（2）將獲得的陽(yáng)性農(nóng)桿菌 LBA4404 侵染萊茵衣藻FACHB479獲得轉(zhuǎn)
（3）提取萊茵衣藻基因組DNA和RNA通過(guò)PCR及RT-PCR鑒定陽(yáng)性轉(zhuǎn)基因藻株；
（4）將鑒定成功的藻株進(jìn)行繼代培養(yǎng)，保證實(shí)驗(yàn)材料的充足與保存。
4.權(quán)利要求 1 所述的雙元表達(dá)載體在攜帶外源
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