本發明公布了一種減少液體菌種培養過程操作污染的方法，包括以下操作步驟：1）配制培養基，將培養基原料煮好后分裝到培養管中；2）消毒滅菌，在溫度120℃、壓力0.12MPa下滅菌30—45分鐘；3）接種，在無菌條件下，從培養管中選取菌種塊置于培養瓶中，封口，同時將連接管插入培養瓶的管口內，封口，在18—20℃下培養，培養3—5天即可。本發明所述的蛹蟲草菌絲體的培養方法，可應用于其他液體菌種的培養，培養過程中僅有一次開口，無其他開口，培養在無菌密閉環境下進行，有效解決培養過程中的操作污染問題。

技術領域

本發明涉及微生物培養技術領域，具體涉及一種減少液體菌種培養過程操作污染的方法。

背景技術

液體菌種是指用液體培養基，在生物發酵罐中，經過深層培養技術生產的液體形態的食用菌菌種。

在蛹蟲草菌絲體等液體菌種在培養過程中，容易引入操作污染，最終造成培養的蛹蟲草菌絲體中含有較多雜菌，且現有培養過程中，操作污染不可控制，無法得到解決。

而引入操作污染的方法較多，工作人員在操作過程中無法做到一一排查，很難提高最終成品菌種的純度。

基于此，研究并開發設計一種減少液體菌種培養過程操作污染的方法。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是現有蛹蟲草菌絲體等液體菌種培養過程中引入污染最終導致成品中含雜菌較多，影響產品純度。本發明的目的在于提供一種減少液體菌種培養過程操作污染的方法，解決了培養過程中操作污染的技術問題。

本發明通過下述技術方案實現：

一種減少液體菌種培養過程操作污染的方法，包括以下操作步驟：

)配制培養基

將配制好的培養基分裝到培養管中；

2)消毒滅菌

對培養管中的培養基滅菌30—45分鐘；

3)接種

在無菌條件下，將第一連接管的兩端分別插入至第一培養瓶、第二培養瓶中，從培養管中選取菌種塊通過第一培養瓶的開口置于第一培養瓶的瓶內，封口，第一培養瓶內裝有固體培養基，第二培養瓶為空瓶，第一培養瓶內接種后，第一培養瓶內固體培養基通過第一連接管移入第二培養瓶中，在18—20℃下培養，培養3—5天即可；

第三培養瓶中裝入液體培養基，第二培養瓶與第三培養瓶通過第二連接管連接，待第一培養瓶、第二培養瓶內有菌落出現時，將第三培養瓶中的液體培養基分別反壓至第一培養瓶、第二培養瓶內進行深層培養，然后將第一培養瓶、第二培養瓶內培養好的菌種通過密閉管道反壓至發酵罐中培養。

在這個培養過程中，僅存在一次開口，即在將培養管中的菌種塊置于第一培養瓶瓶內這一操作中，在后續處理操作中將第一培養瓶內的固體培養基通入第二培養瓶，第三培養瓶的液體培養基分別反壓至第一培養瓶、第二培養瓶內，的操作均通過消毒滅菌處理的連接管完成，未對第一培養瓶、第二培養瓶、第三培養瓶進行開口操作過。同時，培養過程中應用到的容器、連接管均經過滅菌徹底處理，確保未引入污染。因此，整個操作過程中，有效避免了培養過程引入操作污染的問題，從根本上解決了液體菌種培養過程中操作污染引入的路徑。

本發明技術方案中，第三培養瓶的類型還可為發酵罐，將接種后的第一培養瓶、第二培養瓶可直接壓入發酵罐中進行菌落大規模培養，實現全程控制無污染大生產。整個操作過程中，涉及到的容器均經過消毒滅菌處理，未引入操作污染，從而避免其中操作污染問題。