[發明專利]一種食管癌易感基因檢測分型試劑盒及其應用在審
| 申請號: | 201610681381.3 | 申請日: | 2016-08-17 |
| 公開(公告)號: | CN106811519A | 公開(公告)日: | 2017-06-09 |
| 發明(設計)人: | 何侃;栗娟;王佳;其他發明人請求不公開姓名 | 申請(專利權)人: | 上海易瑞生物科技有限公司 |
| 主分類號: | C12Q1/68 | 分類號: | C12Q1/68 |
| 代理公司: | 暫無信息 | 代理人: | 暫無信息 |
| 地址: | 201203 上海市浦東新區中*** | 國省代碼: | 上海;31 |
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| 摘要: | |||
| 搜索關鍵詞: | 一種 食管癌 基因 檢測 試劑盒 及其 應用 | ||
1.一種食管癌易感基因檢測分型試劑盒,其特征在于,所述試劑盒中包括DNA提取試劑盒、DNA擴增試劑盒和測序試劑盒;所述DNA提取試劑盒采用天根生化科技有限公司的DP322型產品,所述DNA擴增試劑盒主要包括擴增引物、酶、PCR Buffer、dNTP Mixture、擴增引物,所述擴增引物為:1)F:5'-GGGGAATGAGACAGAGACCA-3',R:5'-ACCATTCCCAATGTCTGCTC-3',2)F:5'-GGAAGCAGTGAGGTGCAGAGGT-3',R:5'-TCCACAACTGCAAAACGAAGAAA-3',3)F:5'-TCTCAGCCCATGGTGAGCATTA-3',R:5'-CCCCCATATGGTATCCCCAAAG-3';所述酶采用寶生物工程有限公司的TaKaRa TaqTM酶;所述測序試劑盒采用美國ABI公司的Terminator v3.1Cycle Sequencing Kit。
2.根據權利要求1所述的食管癌易感基因檢測分型試劑盒,其特征在于,所述擴增引物為基于基因PDE3D、PLCE1和RUNX1進行設計合成的。
3.一種如權利要求1-2任一所述的食管癌易感基因檢測分型試劑盒的應用,其特征在于,具體步驟為:
(1)首先,將采集回來的樣本按照DNA提取試劑盒提取獲得樣本基因組DNA;
(2)然后,將獲得樣本基因組DNA使用DNA擴增試劑盒進行擴增,得到擴增后的產物,隨后將擴增后的產物進行電泳檢測和純化,得到純化后的產物;
(3)接著,在純化后的產物中加入測序試劑盒進行桑格測序反應;
(4)最后,將上述步驟桑格測序反應結束后的產物進行乙醇/EDTA純化,純化后上樣到測序儀中,序列分析后進行分型判定。
4.根據權利要求3所述的食管癌易感基因檢測分型試劑盒的應用,其特征在于,步驟(1)中樣本為口腔黏膜細胞。
5.根據權利要求3所述的食管癌易感基因檢測分型試劑盒的應用,其特征在于,步驟(4)中乙醇/EDTA純化具體為從PCR儀上取下反應板,3800rpm離心1min;加2.5μl0.125M EDTA,短離心;靜置5min;加20μl預冷無水乙醇,貼封口膜,振蕩混勻;3800rpm,4℃離心30min;離心結束后立即,倒置PCR板低速離心片刻,轉速不超過800rpm;加60μl 75%的預冷乙醇,貼膜,振蕩混勻;3800rpm,4℃離心15min;離心結束后立即,倒置PCR板低速離心片刻,轉速不超過800rpm;PCR儀變性程序處理5min,或避光靜置30min,揮發乙醇;加10μl Hi-Di甲酰胺,貼膜,短離心;95℃變性5min;迅速置于-20℃冰箱。
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