[發明專利]一種RNA反轉錄擴增方法在審
| 申請號： | 201610492890.1 | 申請日： | 2016-06-29 |
| 公開（公告）號： | CN107541507A | 公開（公告）日： | 2018-01-05 |
| 發明（設計）人： | 張師音;葛勝祥;王進;張軍;夏寧邵 | 申請（專利權）人： | 廈門大學 |
| 主分類號： | C12N15/10 | 分類號： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 中國國際貿易促進委員會專利商標事務所11038 | 代理人： | 韓威威 |
| 地址： | 361005 福建*** | 國省代碼： | 福建;35 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 rna 轉錄 擴增 方法 | ||
1.一種RNA反轉錄擴增方法，其包括將RNA反轉錄為cDNA以及不間斷地對cDNA進行擴增的步驟，其特征在于，在對cDNA進行擴增的反應條件下完成RNA反轉錄為cDNA的過程。
2.權利要求1的RNA反轉錄擴增方法，其中所述的在對cDNA進行擴增的反應條件下完成RNA反轉錄為cDNA的過程是指，在cDNA擴增反應的起始階段，即對cDNA擴增反應體系進行升溫以達到cDNA擴增的反應條件過程中，完成RNA反轉錄為cDNA的過程。
3.權利要求2的RNA反轉錄擴增方法，其中所述升溫以達到cDNA擴增的反應條件是指從0℃以上開始升溫，例如從4℃以上開始升溫，例如從室溫開始升溫。
4.權利要求3的RNA反轉錄擴增方法，其中所述升溫以達到cDNA擴增的反應條件是指升溫以達到cDNA擴增的熱變性溫度。
5.權利要求4的RNA反轉錄擴增方法，其中所述對cDNA擴增的方法為聚合酶鏈式反應或等溫擴增技術。
6.權利要求5的RNA反轉錄擴增方法，其中所述的聚合酶鏈式反應為通過加熱模組反復升降溫的熱循環過程進行聚合酶鏈式反應或通過熱對流進行聚合酶鏈式反應。
7.權利要求5的RNA反轉錄擴增方法，其中所述的熱變性溫度是指大于等于90℃，例如是指91℃、92℃、93℃、94℃、95℃、96℃、97℃、98℃或99℃。
8.權利要求2-7任一項的RNA反轉錄擴增方法，其中所述的升溫速率為約2.0-4.5℃/秒，例如小于等于4.4℃/秒、小于等于3.5℃/秒。
9.權利要求1-8任一項的RNA反轉錄擴增方法，其反應體系中包括反轉錄酶，優選地，所述反轉錄酶選自鼠白血病逆轉錄酶(MMLV)和禽類成髓細胞瘤病毒逆轉錄酶(AMV)。
10.權利要求9的RNA反轉錄擴增方法，其中RNA反轉錄為cDNA的過程中反轉錄酶的用量多于單獨設置RNA反轉錄為cDNA的反應條件時反轉錄酶的用量。
11.權利要求9或10的RNA反轉錄擴增方法，其中在升溫過程中，隨著溫度升高，當反轉錄酶失活時，RNA反轉錄為cDNA的過程結束。
12.權利要求1-11任一項的RNA反轉錄擴增方法，其中RNA片段的長度為小于1000bp，例如為小于900bp、小于800bp、小于700bp。
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