[發明專利]一種創制蕪菁和蘿卜屬間雜種的方法有效
| 申請號: | 201610339098.2 | 申請日: | 2016-05-23 |
| 公開(公告)號: | CN105993913B | 公開(公告)日: | 2018-04-24 |
| 發明(設計)人: | 婁麗娜;蘇小俊;婁群峰;許園園 | 申請(專利權)人: | 江蘇省農業科學院 |
| 主分類號: | A01H1/02 | 分類號: | A01H1/02;A01C1/00 |
| 代理公司: | 常州佰業騰飛專利代理事務所(普通合伙)32231 | 代理人: | 翁斌 |
| 地址: | 210014 江*** | 國省代碼: | 江蘇;32 |
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| 摘要: | |||
| 搜索關鍵詞: | 一種 創制 蕪菁 蘿卜 間雜 方法 | ||
1.一種創制蕪菁和蘿卜屬間雜種的方法,具體包括如下步驟:
(1)親本材料的播種:為使花期相遇,在塑料大棚中,于10月份播種蘿卜材料,11月份播種蕪菁材料;
(2)花期雜交授粉:次年3-4月份,以蕪菁為母本,以蘿卜為父本,采用人工去雄、蕾期采用化學藥劑涂抹柱頭的方式進行授粉雜交;具體如下:
(A)對母本花序進行整理,去除已經開放的花以及花序中間特別小的花蕾,保留花序外圍,未開放的大花蕾,進行剝蕾、去雄;
(B)使用質量濃度為60mg/L的GA3對授粉前母本柱頭進行滴浸;
(C)取父本植株上,新開放的新鮮花粉,涂抹柱頭,授粉后套袋,并掛牌標記雜交組合、授粉時間;
(3)考種:6月中旬,種莢成熟后,陸續采收、脫莢,統計收獲種子數量和編號;
(4)組織培養獲得雜種苗:9月中旬,利用組織培養技術對收獲的種子,進行發芽、生長;具體如下:
(A)種子首先進行70%乙醇處理1min;
(B)6%次氯酸鈉溶液處理15min;
(C)無菌水沖洗4~5次;
(D)無菌濾紙吸干種子上殘存水分;
(E)接種于1/2MS培養基上,每瓶接種10~15粒種子;
(F)放置在組織培養室內進行培養,培養條件為:室溫25℃,光照時間為16h/d,光照強度為2000lux條件下培養,獲得無菌苗;
(5)無菌苗馴化;待無菌苗生長至根系健壯后,于馴化前一天,揭開瓶蓋進行練苗,移栽至盛裝滅菌營養土的小缽中,遮陽網遮蓋,進行幼苗生長,一周后,移栽入塑料大棚中,進行常規管理;
(6)雜種形態學鑒定:采用形態學的方法,對雜種苗進行鑒定,利用米尺、直尺以及游標卡尺,分別統計其株高、葉形、葉片大小、花色、花蕾大小、花萼大小、花瓣大小、雄蕊長、雌蕊長,花粉情況,每次測量重復3次;
(7)雜種的細胞學鑒定方法:取花蕾,利用細胞學方法,進行染色體鑒定。
2.根據權利要求1所述創制蕪菁和蘿卜屬間雜種的方法,其特征在于:所述步驟1中親本材料的播種方式為穴播,株距為30cm,大小行距為60×80cm;每穴播種2~3粒種子,出苗后,待植株長至5~10cm,進行間苗,每穴保留一株;常規田間管理。
3.根據權利要求1所述創制蕪菁和蘿卜屬間雜種的方法,其特征在于:所述步驟7中的雜種的細胞學鑒定方法的具體步驟為:
(1)取花序中間小花蕾,用改良卡諾固定液,乙醇:氯仿:乙酸=5:2:3進行固定,一天后更換新的固定液,于4℃冰箱保存備用;
(2)制片,從花序上挑取直徑為0.5~1mm的小花蕾,解剖鏡下剝出花藥,轉移至70%乙醇中,后吸出花藥,蒸餾水沖洗后,保留花藥;
(3)使用4%的纖維素酶RS和4%的果膠酶Y-23混合溶液,37℃酶解2h 10min;
(4)水洗、固定,制片、制片后加DAPI后,在顯微鏡下觀察,并記錄染色體數。
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