技術領域

本發明涉及油脂酶法脫膠技術領域，特別是涉及一種運用固定化復合磷脂酶對油脂進行酶法脫膠的工藝。

背景技術

經壓榨、浸出等方法從油料種子中提取的毛油含有蛋白質、糖類、磷脂、色素、金屬離子、游離脂肪酸等雜質，通常不能直接食用，需要經過一系列油脂精煉工序將這些不利于油脂品質的雜質去除，才能得到符合國家要求的食用油。毛油中所含的磷脂、蛋白質和粘液質等統稱為膠質，毛油中的膠質以磷脂為主，故脫膠也稱為脫磷。要滿足物理精煉的要求，必須在脫膠過程中將油脂的磷含量控制在10mg/kg以內，否則磷脂進入脫臭塔后在高溫下易結焦，附著在設備內壁，并且產生黑色物，影響精煉油的色澤。傳統的脫膠方法主要包括水化脫膠和酸法脫膠：水化脫膠只能除去毛油中的水化磷脂（HP），脫膠后油中磷含量約為 80~200 mg/kg，難以滿足物理精煉的要求；酸法脫膠主要是利用酸化作用將毛油中的非水化磷脂（NHP）轉化為HP，再通過加入適量水將磷脂去除。根據毛油品種和品質的差異，經過酸法脫膠之后，油中磷含量約為15~80 mg/kg，也難以滿足物理精煉的要求。

近年來，酶法脫膠技術因其在提高油脂工業的經濟、環保性能等方面具有巨大的應用價值而受到廣泛關注。磷脂酶是一類廣泛存在于動物、植物和微生物中，能夠特異性水解甘油磷脂的酶，根據磷脂酶與磷脂作用位點的不同，可將磷脂酶分為磷脂酶A₁（PLA₁）、磷脂酶A₂（PLA₂）、磷脂酶B（PLB）、磷脂酶C（PLC）和磷脂酶D（PLD）。目前，在植物油脫膠過程中，主要使用的是PLA₁、PLA₂、PLB和PLC。PLA₁和PLA₂能特異性水解磷脂的Sn-1或Sn-2位酯鍵，生成相應的溶血磷脂；PLB能將Sn-1和Sn-2位的酯鍵都水解，生成相應的甘油酰磷脂，溶血磷脂和甘油酰磷脂都具有很強的親水性，通過水合作用可以方便地除去。PLC能特異性水解磷脂Sn-3位上甘油磷酸酯鍵，生成相應的甘二酯（DAG）和磷酯酸，而DAG作為中性油在后續的精煉過程中不會被去除，因而能有效提高油脂精煉后的得率。

研究表明，雖然單一的磷脂酶對毛油中磷脂具有很好的脫除效果，但反應用時較長，因而限制了其在油脂脫膠工業中的應用。為此，人們研究利用多種磷脂酶對毛油進行脫膠。例如，中國專利CN105038978公開了將PLA和PLC一起用于酶反應以去除油中存在的磷脂的方法，發現當兩種酶一起使用時，酶反應的動力學遠快于任何一種酶單獨使用時的情況，即使未對至少一種酶的反應條件進行優化時，該反應仍比預期更為迅速，脫膠反應可在小于一小時的時間內進行，且脫膠反應時間可快達約30 分鐘。雖然PLA和PLC共同脫膠可大大提高脫膠速度，但PLA和PLC會殘留在油中，且無法重復利用。在酶法脫膠中，為能重復利用磷脂酶，中國專利CN105132147公開了一種用固定化PLC對大豆油脫膠的方法，同時解決了PLC的一次性使用和產物分離純化難等問題，但還是運用單一的磷脂酶，脫膠時間長；中國專利CN104560387公開了一種固定化PLA₁和固定化PLC 聯合應用對大豆毛油進行脫，使用6個批次后，固定化酶相對活力仍保持在80％左右，但該方法中PLA₁和PLC不是同時固定在同一載體上，實際上還是固定化PLA₁和固定化PLC先后單獨起脫膠作用，并沒有發揮PLA₁和PLC的協同作用；中國專利CN102776066公開了一種用固定化PLA₂ 脫膠的方法，該固定化酶重復使用7 次后活力可以保持54%以上，同樣的是運用單一的磷脂酶，脫膠時間長。

因此，為提高毛油的酶法脫膠效率，減少酶在油中的殘留，如何重復運用復合酶脫膠，是本領域研究的一個新方向。

發明內容

本發明主要解決的技術問題是提供一種固定化復合磷脂酶酶法脫膠工藝，先將用于脫膠的PLA₁、PLC、脂肪酶和蛋白酶同時固定在同一大孔樹脂上，然后將同時固定有PLA₁、PLC、脂肪酶和蛋白酶的大孔樹脂用于油脂脫膠，PLA₁、PLC、脂肪酶和蛋白酶發揮協同作用對油脂脫膠，不僅可以重復運用復合磷脂酶脫膠，而且油脂中沒有酶殘留，脫膠效率高，得油率高。

為解決上述技術問題，本發明采用的一個技術方案是：提供一種固定化復合磷脂酶酶法脫膠工藝，包括以下步驟：

A、制備固定化復合磷脂酶；