[發(fā)明專利]一種檢測人EGFR、KRAS、BRAF基因突變的引物組合及其試劑盒在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201610115008.1 | 申請日: | 2016-03-01 |
| 公開(公告)號: | CN105567854A | 公開(公告)日: | 2016-05-11 |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人: | 黃理;劉海云;李保偉 | 申請(專利權(quán))人: | 濟(jì)南銀豐醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)有限公司 |
| 主分類號: | C12Q1/68 | 分類號: | C12Q1/68;C12N15/11 |
| 代理公司: | 濟(jì)南圣達(dá)知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 37221 | 代理人: | 張勇 |
| 地址: | 250000 山東*** | 國省代碼: | 山東;37 |
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| 摘要: | |||
| 搜索關(guān)鍵詞: | 一種 檢測 egfr kras braf 基因突變 引物 組合 及其 試劑盒 | ||
1.一種檢測人EGFR、KRAS、BRAF基因突變的ARMS引物,其特征在于,所述ARMS 引物的序列如SEQIDNO.1至SEQIDNO.31所示。
2.權(quán)利要求1所述的ARMS引物在制備檢測人EGFR、KRAS、BRAF基因突變的試劑 盒中的應(yīng)用。
3.一種檢測人EGFR、KRAS、BRAF基因突變的試劑盒,其特征在于,包括:權(quán)利要求 1所述的ARMS引物和用于擴(kuò)增第一內(nèi)參的引物;
所述第一內(nèi)參為GAPDH基因,用于擴(kuò)增第一內(nèi)參的引物序列如SEQIDNO.32和SEQID NO.33所示。
4.如權(quán)利要求3所述的試劑盒,其特征在于,該試劑盒中,還包括如下物質(zhì)中的至少一 種:DNA聚合酶、DNA聚合酶緩沖液、SYBR-Green-I和4種dNTP混合物。
5.如權(quán)利要求4所述的試劑盒,其特征在于,所述DNA聚合酶為TaqHSDNA聚合酶。
6.如權(quán)利要求3所述的試劑盒,其特征在于,試劑盒中還包括用于對樣品進(jìn)行桑格測序 的試劑,所述試劑中包含用于擴(kuò)增EGFR、KRAS和BRAF基因中任意一個、兩個或全部的 一個或多個外顯子區(qū)域的擴(kuò)增引物對。
7.如權(quán)利要求6所述的試劑盒,其特征在于,所述擴(kuò)增引物對包括:用于擴(kuò)增EGFR基 因的外顯子18的區(qū)域的擴(kuò)增引物對,如SEQIDNO.34和SEQIDNO.35所示;
用于擴(kuò)增EGFR基因的外顯子19的區(qū)域的擴(kuò)增引物對,如SEQIDNO.36和SEQID NO.37所示;
用于擴(kuò)增EGFR基因的外顯子20的區(qū)域的擴(kuò)增引物對,如SEQIDNO.38和SEQID NO.39所示;
用于擴(kuò)增EGFR基因的外顯子21的區(qū)域的擴(kuò)增引物對,如SEQIDNO.40和SEQID NO.41所示;
用于擴(kuò)增KRAS基因的外顯子2的區(qū)域的擴(kuò)增引物對,如SEQIDNO.42和SEQIDNO.43 所示;
用于擴(kuò)增KRAS基因的外顯子3的區(qū)域的擴(kuò)增引物對,如SEQIDNO.44和SEQIDNO.45 所示;
用于擴(kuò)增KRAS基因的外顯子4的區(qū)域的擴(kuò)增引物對,如SEQIDNO.46和SEQIDNO.47 所示;
用于擴(kuò)增BRAF基因的外顯子15的區(qū)域的擴(kuò)增引物對,如SEQIDNO.48和SEQID NO.49所示。
8.如權(quán)利要求6所述的試劑盒,其特征在于,所述用于對樣品進(jìn)行桑格測序的試劑中, 還包含對EGFR、KRAS和BRAF基因擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行測序的測序引物;其序列分別如SEQID NO.34、SEQIDNO.37、SEQIDNO.39、SEQIDNO.41、SEQIDNO.43、SEQIDNO.44、SEQ IDNO.46和SEQIDNO.48所示。
9.權(quán)利要求3-8任一項(xiàng)所述的試劑盒在制備檢測或輔助檢測人EGFR、KRAS、BRAF基 因突變的產(chǎn)品中的應(yīng)用。
10.一種非診斷目的的利用上述試劑盒檢測人EGFR、KRAS、BRAF基因突變的方法, 其特征在于,采用權(quán)利要求1所述的ARMS引物對待測樣品的目的基因進(jìn)行PCR擴(kuò)增,在 81℃采集熒光信號,根據(jù)Ct值對檢測結(jié)果進(jìn)行判讀,若ΔCt-1的ΔCt-2差別在1個循環(huán)內(nèi), ΔCt-2>8,則檢測結(jié)果為陰性;
若ΔCt-1>ΔCt-2,ΔCt-2<8,則檢測結(jié)果為陽性。
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