[發(fā)明專利]誘導(dǎo)樹突狀細(xì)胞成熟的方法和樹突狀細(xì)胞有效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201610113529.3 | 申請(qǐng)日: | 2016-02-28 |
| 公開(kāi)(公告)號(hào): | CN105647867A | 公開(kāi)(公告)日: | 2016-06-08 |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人: | 曾憲卓;魯菲 | 申請(qǐng)(專利權(quán))人: | 深圳愛(ài)生再生醫(yī)學(xué)科技有限公司 |
| 主分類號(hào): | C12N5/0784 | 分類號(hào): | C12N5/0784;C12N5/078 |
| 代理公司: | 暫無(wú)信息 | 代理人: | 暫無(wú)信息 |
| 地址: | 518057 廣東省深圳市南山區(qū)*** | 國(guó)省代碼: | 廣東;44 |
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| 摘要: | |||
| 搜索關(guān)鍵詞: | 誘導(dǎo) 樹突 細(xì)胞 成熟 方法 | ||
1.一種誘導(dǎo)樹突狀細(xì)胞成熟的方法,其特征在于,包括以下步驟:
獲取樹突狀細(xì)胞前體單個(gè)核細(xì)胞,經(jīng)第一誘導(dǎo)劑培養(yǎng)4~7天,每隔2~3 天更換培養(yǎng)基,獲得未成熟樹突狀細(xì)胞;
然后,再添加第二誘導(dǎo)劑培養(yǎng)所述未成熟樹突狀細(xì)胞2~4天至樹突狀細(xì) 胞成熟;
其中,第一誘導(dǎo)劑包括:rhGM-CSF、GM-CSF、IL-4、rhIL-4和IL-13;
第二誘導(dǎo)劑包括rhTNF-α、沒(méi)食子酸或核桃青皮提取物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的誘導(dǎo)樹突狀細(xì)胞成熟的方法,其特征在于,所 述第一誘導(dǎo)劑中,rhGM-CSF的濃度為800~1200U/ml、GM-CSF的濃度為 5~15ng/mL、IL-4的濃度為5~15ng/mL、rhIL-4的濃度為800~1200U/ml和 IL-13的濃度為5~15ng/mL。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的誘導(dǎo)樹突狀細(xì)胞成熟的方法,其特征在于,所 述第一誘導(dǎo)劑中,rhGM-CSF的濃度為1000U/ml、GM-CSF的濃度為 10ng/mL、IL-4的濃度為10ng/mL、rhIL-4的濃度為1000U/ml和IL-13的 濃度為10ng/mL。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的誘導(dǎo)樹突狀細(xì)胞成熟的方法,其特征在于,所 述第二誘導(dǎo)劑中,rhTNF-α的濃度為800~1200U/ml、沒(méi)食子酸的濃度為 5~15μg/ml,或核桃青皮提取物的濃度為10~30μg/ml。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的誘導(dǎo)樹突狀細(xì)胞成熟的方法,其特征在于,所 述第二誘導(dǎo)劑中,rhTNF-α的濃度為1000U/ml、沒(méi)食子酸的濃度為10μ g/ml,或核桃青皮提取物的濃度為20μg/ml。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的誘導(dǎo)樹突狀細(xì)胞成熟的方法,其特征在于,所 述樹突狀細(xì)胞前體單個(gè)核細(xì)胞來(lái)源于外周血。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的誘導(dǎo)樹突狀細(xì)胞成熟的方法,其特征在于,所 述樹突狀細(xì)胞前體單個(gè)核細(xì)胞的獲取過(guò)程,包括以下步驟:
抽取外周靜脈血,稀釋,添加淋巴細(xì)胞分離液離心10~20分鐘后,分離 獲取外周血單個(gè)核細(xì)胞;用完全培養(yǎng)基懸浮細(xì)胞濃度至(2~6)×106個(gè)/ml, 孵育1~3小時(shí),更換新的完全培養(yǎng)基,收集細(xì)胞懸液,即為樹突狀細(xì)胞前體 單個(gè)核細(xì)胞懸液。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的誘導(dǎo)樹突狀細(xì)胞成熟的方法,其特征在于,所 述完全培養(yǎng)基中含有10%~15%的胎牛血清、50~150U/ml青霉素和50~150U/ml 鏈霉素。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的誘導(dǎo)樹突狀細(xì)胞成熟的方法,其特征在于,還 包括以下步驟:添加所述第一誘導(dǎo)劑之前,需調(diào)節(jié)所述樹突狀細(xì)胞前體單個(gè) 核細(xì)胞濃度為(1~3)×106個(gè)/ml。
10.一種樹突狀細(xì)胞,其特征在于,是由權(quán)利要求1~9任一項(xiàng)所述的誘 導(dǎo)樹突狀細(xì)胞成熟的方法所獲得的。
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