技術領域

本發明屬于基因工程領域，涉及基因工程疫苗，具體涉及一種用于治療乳腺癌的基因工程疫苗及其制備方法。

背景技術

全球乳腺癌發病率自20世紀70年代末開始一直呈上升趨勢。美國8名婦女一生中就會有1人患乳腺癌。中國不是乳腺癌的高發國家，但不宜樂觀，近年我國乳腺癌發病率的增長速度卻高出高發國家1～2個百分點。據國家癌癥中心和衛生部疾病預防控制局2012年公布的2009年乳腺癌發病數據顯示：全國腫瘤登記地區乳腺癌發病率位居女性惡性腫瘤的第1位，女性乳腺癌發病率(粗率)全國合計為42.55/10萬，城市為51.91/10萬，農村為23.12/10萬。

目前，腫瘤疫苗主要有如下類型。

腫瘤細胞疫苗。傳統的瘤苗是通過自體或同種異體腫瘤細胞或其粗提物，經過物理、化學或生物方法處理后，抑制其生長能力，保持并增強其免疫原性。但這種疫苗的免疫原性弱，難以引起免疫應答。后來，將腫瘤細胞加入佐劑如卡介苗(BCG)、短小棒狀桿菌或弗氏佐劑等以增強其免疫原性，但效果仍不理想。而且這種疫苗制備耗時較長，不能滿足快速免疫的需要。近年來對全細胞瘤苗進行了改進，已嘗試用建株的的腫瘤細胞系作為其替代物。動物實驗證實，使用處理過的建株腫瘤細胞作為全細胞瘤苗具有以下優點：(a)腫瘤細胞表達多種抗原，避免了分離、鑒定抗原的煩瑣；(b)用作疫苗的腫瘤細胞表達的MHC可以與患者不匹配，可作為同種異體抗原，激發免疫應答；(c)用建株腫瘤細胞制備疫苗，簡單易行，大大縮短了患者從確診到接種疫苗的時間。

腫瘤基因工程疫苗。腫瘤基因工程疫苗是一種通過基因重組技術將目的基因導入受體細胞而制備的疫苗。隨著免疫基礎理論的發展，各種疫苗的研制也日新月異。國內外學者己將不同的目的基因導入受體細胞，提高其免疫原性或活化效應細胞的能力。這種疫苗主要從以下幾個方面來實現其抗瘤效應：(a)提高機體抗瘤能力；(b)增強腫瘤免疫原性；(c)基因產物直接殺傷瘤細胞。近幾年有關腫瘤基因工程疫苗研究的熱點主要集中在GM-CSF基因疫苗、多基因聯合修飾疫苗、基因修飾樹突狀細胞和構建樹突狀細胞疫苗，以及免疫修飾基因與自殺基因的聯合。如將B7-l和IL-4，B7-l和IL-7，IFN-Y、GM-CSF和B7-l，IL-12、B7-l和腫瘤抗原等多細胞因子基因進行聯合修飾。多種細胞因子與自殺基因的聯合轉染能揚長避短相互協同，具有更好的免疫效應。

樹突狀細胞(DC)疫苗。目前用腫瘤抗原肽、腫瘤細胞裂解物、腫瘤細胞RNA體外沖擊DC或將TAA基因轉入DC內，均被認為是頗有前途的瘤苗制備方案。但各種體外沖擊手段均有半衰期短的缺點，若要誘導出高水平的持久的抗腫瘤免疫反應，需反復多次體內回輸致敏DC。另外一種用腫瘤cDNA或mRNA體外沖擊DC的方法可以解決抗原丟失或抗原變異的問題，而且又避免了分離大量腫瘤抗原肽的困難。現代分子生物學技術己可以較容易地大量擴增腫瘤mRNA及構建腫瘤的cDNA文庫，這為我們提供了龐大的腫瘤抗原庫，也為應用cDNA、mRNA體外沖擊DC細胞提供了原料。體外用腫瘤cDNA或mRNA沖擊DC細胞無須確定腫瘤抗原，而且理論上講沖擊后的DC細胞可以表達任何一種可能的腫瘤相關抗原，因而被一些研究采用并取得了良好的效果。

肽疫苗。抗原提呈過程和免疫識別的研究，己證實腫瘤抗原須在APC胞內降解為短肽，最后形成肽-MHC-TCR復合物才能為T細胞識別，并激發CTL反應，這為肽疫苗的研究提供了理論依據。所用腫瘤抗原多肽可分為兩類：人工合成多肽和自然源性多肽。合成多肽疫苗是隨著腫瘤抗原表位的確定發展起來的。根據腫瘤抗原表位合成相應的多肽，然后與佐劑一起或單獨免疫，可以誘導針對免疫原性表位的抗腫瘤免疫反應。合成多肽疫苗的優點在于：誘導免疫反應的特異性較高；可以大量合成；抗原純度高；對各種組織型應用廣泛；僅需要少量的病人腫瘤組織(用于確定抗原的表達)；可以激活CD+4T和CD+ST細胞。合成肽疫苗的這些優點使之成為一種重要的的疫苗策略。