技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于藥物分析方法領(lǐng)域，涉及丙二酰基人參皂苷的含量測定方法，特別的，涉及一種柱切換高效液相色譜法測定丙二酰基人參皂苷的含量測定方法。

背景技術(shù)

對照品是化學(xué)定量分析中測量化學(xué)成分量值的基本參照，在藥物分析中具有重要意義。然而，很多化學(xué)成分難以獲得足夠的對照品，或者其對照品因為理化性質(zhì)不穩(wěn)定難以保存，這種情況下很難測量該化學(xué)成分的準(zhǔn)確量值。

丙二酰基人參皂苷(malonyl-ginsenoside)稱為丙二酸單酰基人參皂苷，在鮮人參及其藥材中含量很高，其中，鮮參中丙二酰基人參皂苷含量比中性人參皂苷高很多，生曬參中丙二酰基人參皂苷含量略高于中性人參皂苷。是一類極性大，親水性強，極易溶于水的酸性皂苷，該類化合物分子中酰基鍵極不穩(wěn)定，很容易水解，遇酸、堿或在熱水、熱甲醇條件下都會發(fā)生水解反應(yīng)脫去丙二酸，成為相應(yīng)的人參皂苷。研究發(fā)現(xiàn)人參中，以丙二酰基人參皂苷M-Rb1、M-Rb2、M-Rc為主，具有降糖活性，能降低糖尿病模型小鼠血糖，促進肝糖元合成。丙二酰基人參皂苷Rb1具有促進小鼠齒狀突長時呈增效作用，對神經(jīng)生長因子誘導(dǎo)外培養(yǎng)雞胚的背根神經(jīng)突的外生長有增強作用。由此可見，準(zhǔn)確測定人參及其制品中各類丙二酰基人參皂苷的含量對于評價人參產(chǎn)品的品質(zhì)，指導(dǎo)臨床用途有重要的意義。

現(xiàn)有技術(shù)中一般采用差值法估算人參中的丙二酰基人參皂苷的含量，即先測定人參中中性人參皂苷的含量，然后將人參提取物用堿水解，測定水解后樣品中中性人參皂苷的含量，減除水解前樣品中相應(yīng)的中性人參皂苷的含量，差值為相應(yīng)的丙二酰基人參皂苷的含量。

這一方法的缺點在于，第一，水解產(chǎn)生相同中性人參皂苷的丙二酰基人參皂苷類物質(zhì)至少兩種，可能很多種，因此無法測定每一種丙二酰基人參皂苷的含量；第二，由于丙二酰基人參皂苷化學(xué)性質(zhì)不穩(wěn)定，因此其對照品無法長時間保存和運輸；第三，常溫下這一類化合物在溶液中穩(wěn)定時間不足6小時，用其本身作為對照品難以完成常規(guī)測試過程中的方法學(xué)考察，無法確定數(shù)據(jù)的可靠性。而現(xiàn)有技術(shù)中的檢測方法均不能解決上述技術(shù)缺陷。因此，開發(fā)一種行之有效的檢測方法測定丙二酰基人參皂苷的含量極為重要。

發(fā)明內(nèi)容

為填補現(xiàn)有技術(shù)的空白，本發(fā)明旨在提供一種能夠準(zhǔn)確測定人參及其制品中不同丙二酰基人參皂苷含量的方法。

本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)的,具體為：

1)取含丙二酰基人參皂苷的組分B，將其水解獲得水解產(chǎn)物C，包括由丙二酰基人參皂苷水解產(chǎn)生的中性人參皂苷；

2)測定步驟1)中所得中性人參皂苷的含量D；

3)根據(jù)D計算組分B中丙二酰基人參皂苷的含量。

優(yōu)選的，步驟1)中，所述水解方法為堿溶液水解法。

進一步優(yōu)選的，堿溶液選自氫氧化鈉或氫氧化鉀水溶液，濃度為0.1～0.5M，水解液溫度為60～90℃，水解時間4～10min。

進一步優(yōu)選的，水解的具體步驟為，先在線將組分B其富集于固相萃取小柱，然后向固相萃取小柱中通入堿溶液而進行水解。

更優(yōu)選的，所述的富集方法為，采用閥切換法在線將丙二酰基人參皂苷吸附于固相萃取小柱上；優(yōu)選的，閥切換法的具體操作為，使丙二酰基人參皂苷組分B的洗脫組分通過固相萃取富集柱，同時通過泵添加調(diào)節(jié)劑改變流出組分的溶劑組成，使含丙二酰基人參皂苷組分B和其它成分完全吸附于富集柱上，再次通過閥切換，將堿溶液泵入富集柱中，使丙二酰基人參皂苷的丙二酰基水解,獲得水解產(chǎn)物C。

更優(yōu)選的，采用閥切換法富集皂苷的富集條件為，富集柱填料為聚乙烯苯樹脂，具體規(guī)格：粒徑30～50um、填料用量10～30mg、內(nèi)徑1/8～1/16英寸，修飾劑為純水，流速0.1～0.5mL/min。

優(yōu)選的，步驟2)中的具體測定方法為，將步驟1)中所述的固相萃取小柱直接連接于色譜柱的前端進行色譜分析，測定水解產(chǎn)物C中相應(yīng)的中性人參皂苷含量D；優(yōu)選的，所述鏈接方式為串聯(lián)法。

進一步優(yōu)選的，所述步驟2)中，具體的測定方法為，①水解結(jié)束后，通過閥切換，清洗管路和富集柱中的堿溶液，②再次通過閥切換，記錄丙二酰基人參皂苷水解產(chǎn)生的相應(yīng)中性人參皂苷D的儀器型號響應(yīng)值A(chǔ)1，③再將對照品中性人參皂苷進樣，記錄其響應(yīng)值A(chǔ)2，④將響應(yīng)值A(chǔ)1與A2進行比較，計算水解產(chǎn)生的中性人參皂苷D的含量。