本發(fā)明提供了一種從含有谷胱甘肽的溶液中分離純化還原型谷胱甘肽的方法，包括步驟：1)向谷胱甘肽溶液中加入氧化劑，使其氧化至氧化型谷胱甘肽；2)向溶液中加入酸，調(diào)節(jié)pH至1.0?4.0，離心或過濾；3)將步驟2)得到的離心或過濾后的溶液分別經(jīng)過離子交換樹脂、吸附樹脂處理，得到氧化型谷胱甘肽洗脫液。4)將步驟3)得到的洗脫液使用還原劑進行還原得到谷胱甘肽溶液，將還原得到的谷胱甘肽溶液用吸附樹脂脫鹽，之后濃縮、結(jié)晶、干燥，得到谷胱甘肽。本發(fā)明操作簡便、低污染、無需低溫和氮氣保護，能耗低，反應(yīng)條件溫和，適于工業(yè)化生產(chǎn)，得到的固體還原型谷胱甘肽的純度＞99％。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及藥物分離純化領(lǐng)域，具體而言，涉及一種分離純化還原型谷胱甘肽的方法。

背景技術(shù)

谷胱甘肽(Glutathione，GSH)是一種重要的調(diào)節(jié)生理功能的藥物，在臨床上的應(yīng)用越來越廣，已成為醫(yī)學(xué)上重要的具有調(diào)節(jié)人體免疫功能和輔助抗癌功能的藥物之一。GSH的抗氧化性又使它在食品工業(yè)中的應(yīng)用備受人們關(guān)注。谷胱甘肽是由谷氨酸、半胱氨酸、甘氨酸縮合而成的一種含γ-谷氨酰基和巰基的生物活性三肽類化合物，在蛋白質(zhì)和DNA的合成、氨基酸的轉(zhuǎn)運、細(xì)胞的保護等重要的生物功能中起著直接或間接的作用。它主要分布于動物、植物、微生物細(xì)胞中，被廣泛應(yīng)用于臨床醫(yī)學(xué)、運動保健、食品加工等很多領(lǐng)域。

谷胱甘肽的相對分子質(zhì)量為307.33，熔點為189-193℃，其晶體呈無色透明細(xì)長柱狀，等電點為5.93。它溶于水、稀醇、液氨和二甲基甲酰胺，而不溶于醇、醚和丙酮。谷胱甘肽固體相對較穩(wěn)定，而水溶液在空氣中易被氧化。兩分子還原型谷胱甘肽(GSH)的巰基氧化縮合為二硫鍵即可得到氧化型谷胱甘肽(GSSG)。

谷胱甘肽的生產(chǎn)目前主要有酶法和酵母發(fā)酵法兩種，不管是哪種方法生產(chǎn)的谷胱甘肽，粗提液中均含有很多雜質(zhì)，如蛋白質(zhì)、多糖、多肽、氨基酸、鹽類等等，而谷胱甘肽在水溶液中的穩(wěn)定性不好，易氧化和降解，這給分離純化帶來了很大的困難，因此高純度、高收率、環(huán)保低能耗的谷胱甘肽工業(yè)化分離比較困難。

目前，有報道的分離純化谷胱甘肽的方法有以下幾種：銅鹽法、離子交換法、電滲析法、瓊脂糖凝膠過濾法、雙水相結(jié)合溫度誘導(dǎo)相分離法及金屬汞親和層析法，其中有工業(yè)前景的是：銅鹽法和離子交換法。

1)銅鹽法：氧化亞銅能與巰基特異性結(jié)合，從而將GSH從水相結(jié)合到固相，方便對GSH與大部分雜質(zhì)的分離。但是銅鹽法有很大的局限性。首先，固相的銅鹽需要用硫化氫還原以釋放GSH，而硫化氫的氣味重、有毒，會導(dǎo)致較高的污染；其次，溶液中含有巰基的雜質(zhì)也較多，銅鹽法難以將它們與GSH分離，而其中有些雜質(zhì)結(jié)晶去除困難，這便導(dǎo)致了GSH最終成品的純度不高，某些雜質(zhì)超標(biāo)。

2)離子交換法：離子交換法又分為陽離子交換和陰離子交換兩種，目前均有報道，如中國專利申請CN200810233835.6中提供了一種陽離子交換樹脂分離純化方法；中國專利申請CN201210111271.5中提供了一種陰離子交換樹脂分離純化的方法。離子交換法具有操作便捷、低污染的特性，但同樣有其缺點。首先，GSH在水溶液中穩(wěn)定性差，離子交換的過程中容易出現(xiàn)降解和氧化的現(xiàn)象，所以需要在密閉環(huán)境同時進行低溫和氮氣保護才能保持GSH不降解和氧化；其次，離子交換法對某些與GSH性質(zhì)相似的雜質(zhì)無法去除，即使結(jié)合了吸附樹脂也會因為某些雜質(zhì)與GSH極性差異小而導(dǎo)致難以分開，最終成品的雜質(zhì)非常容易超標(biāo)。

因此，工業(yè)上仍需要研究和開發(fā)更好的分離純化谷胱甘肽的方法。

發(fā)明內(nèi)容

鑒于現(xiàn)有提取工藝存在的問題，本發(fā)明提供了一種從含有谷胱甘肽的溶液中分離純化還原型谷胱甘肽的新方法，所述方法環(huán)保且獲得的谷胱甘肽純度較高。

具體而言，本發(fā)明提供的一種從含有谷胱甘肽的溶液中分離純化還原型谷胱甘肽的方法包括以下步驟：

1)向谷胱甘肽(GSH)溶液中加入氧化劑，使其氧化至氧化型谷胱甘肽(GSSG)；