技術領域

本發明屬于多肽提取技術領域，具體涉及一種生物活性肽的酶法提取工藝。

背景技術

生物活性肽是指具有特殊生物活性的多肽。在蛋白質的空間結構中具有生物活性的多肽類，通過相應的酶解，可將其釋放出來，單獨從蛋白鏈中釋放片斷，可顯示出獨特的生物活性，形成的生物活性肽。生物活性肽具有豐富的生物學功能，如降膽固醇、改善元素吸收和礦物質運輸、免疫調節抗衰老、抗血栓、抗高血壓、激素作用、促進生長、抑制細菌和病毒、抗癌抗氧化、調節口味和硬度、食品風味等。所以，生物活性肽是選藥物、制疫苗及食品添加劑的天然資源庫。

酶水解法是選擇合適的蛋白酶水解各種蛋白質來獲得生物活性肽，與酸水解和堿水解比較，酶法水解蛋白質具有多種優點：反應條件溫和，反應時間短，效率高，不破壞氨基酸，產品純度高，產物易分離，成本低等。影響酶解過程的主要因素有：底物添加量、酶濃度、反應溫度和初始pH值等。高溫、過酸或者過堿對酶的變性是不可逆的，因此，在試驗中尤其要注意控制初始pH及反應溫度，以防止酶變性失活。蛋白酶的作用是水解蛋白質中的肽鍵，將大分子長鏈蛋白質變成長短不一的肽段和氨基酸。由于不同蛋白酶酶解位點不同，因此，同樣的蛋白質在不同酶作用下可產生不同的多肽片段。研究表明，一些抑制肽的形成需要2種以上的蛋白酶參與水解。因而，如何選擇符合生產要求的復合蛋白酶就要根據生物活性肽的結構功能特性來定。目前國內外針對酶解法制備多肽已做了大量研究。武萌萌等用堿性蛋白酶水解螺旋藻蛋白制備生物活性肽；朱艷華用堿性蛋白酶酶解玉米粉獲得生物活性肽，此外還有酶解黑豆、金絲棗、銀杏等各種來源的生物活性肽，目前生物活性肽酶解時間長，通常在幾個小時或幾十個小時不等，酶用量多，操作周期長，生產效率低。

發明內容

為了解決上述問題，本發明提供一種生物活性肽的酶法提取工藝，在酶解過程中加入氨基酸，可以大幅縮短酶解時間，減少蛋白酶的用量。

為了實現上述目的，本發明采用的技術方案如下：

一種生物活性肽的酶法提取工藝，其特征在于，在加入蛋白酶酶解時，同時加入氨基酸，所述氨基酸的添加量根據提取原料的質量添加，每1g提取原料添加10~30mg氨基酸。

氨基酸的添加量根據提取原料的質量每1g提取原料添加20mg。

酶解時加入的蛋白酶為堿性蛋白酶時，加入的氨基酸為堿性氨基酸。

酶解時加入的蛋白酶為中性蛋白酶時，加入的氨基酸為中性氨基酸。

酶解時加入的蛋白酶為酸性蛋白酶時，加入的氨基酸為酸性氨基酸。

所述堿性氨基酸為賴氨酸、精氨酸或者組氨酸中的至少一種。

所述中性氨基酸為甘氨酸、丙氨酸、亮氨酸、蘇氨酸、色氨酸或者甲硫氨酸中的至少一種。

所述酸性氨基酸為天冬氨酸或者谷氨酸中的至少一種。

有益效果：本發明提供一種生物活性肽的酶法提取工藝，在酶解過程中加入氨基酸，可以大幅縮短酶解時間，減少蛋白酶的用量。

具體實施方式

以下實施例中用凱氏定氮法測定溶液中的多肽含量。堿性蛋白酶購自于上海中信生物有限公司，中性蛋白酶購自于上海藍季科技發展有限公司。

實施例1黑豆多肽的酶法提取工藝

一種黑豆多肽的酶法提取工藝，取50g黑豆，粉碎至200目，加蒸餾水600mL，調節pH為9.0，溫度為50℃，加入200U堿性蛋白酶，加入1g賴氨酸，定時取樣測定溶液中多肽含量，結果顯示，在水解的前30min，多肽含量呈直線上升趨勢，30min以后趨于穩定，可見酶解完全需要30min。

對比例1

取50g黑豆，粉碎至200目，加蒸餾水600mL，調節pH為9.0，溫度為50℃，加入200U堿性蛋白酶，定時取樣測定溶液中多肽含量，結果顯示，在水解的8h內，多肽含量呈緩慢上升趨勢，8h以后趨于穩定，可見酶解完全至少需要8h。

對比例2

取50g黑豆，粉碎至200目，加蒸餾水600mL，調節pH為9.0，溫度為50℃，加入2000U堿性蛋白酶，定時取樣測定溶液中多肽含量，結果顯示，在水解的4h內，多肽含量呈緩慢上升趨勢，4h以后趨于穩定，可見酶解完全至少需要4h。

對比例3

取50g黑豆，粉碎至200目，加蒸餾水600mL，調節pH為9.0，溫度為50℃，加入200U堿性蛋白酶，加入1g絲氨酸，定時取樣測定溶液中多肽含量，結果顯示，在水解的3h內，多肽含量呈緩慢上升趨勢，3h以后趨于穩定，可見酶解完全至少需要3h。