技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬免疫檢測(cè)分析技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種胃蛋白酶原Ⅰ酶促化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑盒。

背景技術(shù)

該測(cè)試用于診斷嚴(yán)重萎縮性胃體胃炎，以及提示早期胃癌風(fēng)險(xiǎn)。血清或血漿PGI(P-PGI,S-PGI)檢測(cè)法是檢測(cè)嚴(yán)重萎縮性胃體胃炎的一種可靠方法，其敏感性和特異性分別為92％和90％。

胃蛋白酶原(Pesinogen,PG)是胃液中胃蛋白酶的無(wú)活性前體，由胃體的主細(xì)胞和黏液細(xì)胞分泌。大部分分泌到胃腔，少量可在血液中被檢測(cè)到。PGI水平與胃體黏膜主細(xì)胞的數(shù)量具有可靠相關(guān)性。血清PG水平反映了不同部位胃黏膜的形態(tài)和功能：PG?Ⅰ是檢測(cè)胃泌酸腺細(xì)胞功能的指標(biāo)，胃酸分泌增多PG?Ⅰ升高，分泌減少或胃黏膜腺體萎縮PG?Ⅰ降低；PG?Ⅱ與胃底黏膜病變的相關(guān)性較大(相對(duì)于胃竇黏膜)，其升高與與胃底腺管萎縮，胃上皮化生或假幽門腺化生、異型增值有關(guān)：PG?Ⅰ/Ⅱ比值進(jìn)行性降低與胃黏膜萎縮進(jìn)展相關(guān)。因此，聯(lián)合測(cè)定PG?Ⅰ和PG?Ⅱ比值可起到胃底腺黏膜“血清活檢測(cè)”的作用。

化學(xué)發(fā)光技術(shù)興起于上個(gè)世紀(jì)80年代是繼酶聯(lián)免疫技術(shù)和放免技術(shù)后發(fā)展起來(lái)的新興技術(shù)，由于其高靈敏度、高特異性，同時(shí)方法簡(jiǎn)便、快速，標(biāo)記結(jié)合物穩(wěn)定，無(wú)放射同位素?fù)p傷和污染等特點(diǎn)，在近些年得到了飛速發(fā)展。化學(xué)發(fā)光的原理是在化學(xué)反應(yīng)中生成的不穩(wěn)定的激發(fā)態(tài)中間體，當(dāng)其回到基態(tài)時(shí)，釋放光子。在免疫檢測(cè)分析中，使用化學(xué)發(fā)光技術(shù)，可以使檢測(cè)范圍達(dá)到6個(gè)數(shù)量級(jí)，而且靈敏度很高，加上標(biāo)記物穩(wěn)定，有效期長(zhǎng)，使其受到越來(lái)越多的關(guān)注與應(yīng)用。磁微粒分離酶聯(lián)免疫檢測(cè)技術(shù)是一種以磁性微粒為固相分離載體，將免疫磁微粒分離技術(shù)與酶聯(lián)免疫技術(shù)相結(jié)合而建立的一種新型免疫檢測(cè)方法。傳統(tǒng)ELISA方法，抗原，抗體的結(jié)合反應(yīng)是在固相(ELISA板反應(yīng)孔)表面進(jìn)行的，而磁分離酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法，抗原、抗體的結(jié)合反應(yīng)也在近似液相的條件下進(jìn)行，因而反應(yīng)快速，徹底。與傳統(tǒng)ELISA相比具有自動(dòng)化程度高、靈敏度高、檢測(cè)用時(shí)少的優(yōu)點(diǎn)。但目前市場(chǎng)上檢測(cè)PG?Ⅰ試劑盒主要以傳統(tǒng)ELISA法為主。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明需要解決的技術(shù)問(wèn)題在于提供一種胃蛋白酶原Ⅰ酶促化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑盒，使對(duì)人胃蛋白酶原Ⅰ檢測(cè)實(shí)現(xiàn)了自動(dòng)化、高特異性和靈敏度。

一種胃蛋白酶原Ⅰ酶促化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑盒，其特征在于，該試劑盒包括酶標(biāo)液、胃蛋白酶原Ⅰ標(biāo)準(zhǔn)品、包被胃蛋白酶原Ⅰ單克隆抗體的免疫磁珠、樣本稀釋液、化學(xué)發(fā)光底物液、洗滌液。

所述的一種胃蛋白酶原Ⅰ酶促化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑盒，其特征在于，將胃蛋白酶原Ⅰ單克隆抗體包被在磁珠微球表面，經(jīng)捕捉樣本中的胃蛋白酶原Ⅰ以及加入酶標(biāo)胃蛋白酶原Ⅰ單克隆抗體試劑后，形成固相-抗體-抗原-酶標(biāo)抗體夾心免疫復(fù)合物。

所述的一種胃蛋白酶原Ⅰ酶促化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述的包被胃蛋白酶原Ⅰ單克隆抗體的免疫磁珠為含有標(biāo)記有抗胃蛋白酶原Ⅰ單克隆抗體的磁性微球；

所述的酶標(biāo)液中酶標(biāo)抗體的酶是辣根過(guò)氧化物酶；

所述的洗滌液是含有吐溫-20的緩沖液；

所述的化學(xué)發(fā)光底物溶液是酶促化學(xué)發(fā)光底物溶液。

任其一所述的試劑盒，其特征在于，所述包被胃蛋白酶原Ⅰ單克隆抗體的免疫磁珠按如下方法制得：

(1)初洗緩沖液的配制：

稱取0.1952g的MES?hygrate于100ml的純水中，調(diào)整pH至5.0；

加入50μl吐溫-20，配成0.01mol/L?MES緩沖液，調(diào)整pH至5.0；

(2)偶聯(lián)緩沖液的配制：

稱取0.38138g?Na₂B₄O₇·10H₂O溶于40ml純水中，得到0.05mol/L的硼砂溶液；

稱取0.1237g?H₃BO₃溶于10ml純水中，得到0.2mol/L的硼酸溶液；

取18ml?0.05mol/L的Na₂B₄O₇溶液與2ml?0.2mol/L的H₃BO₃溶液混合，定容至80ml得0.05mol/L硼酸緩沖液；

(3)終洗液的配制：

稱取2.78g?Na₂HPO₄溶于100ml純水得0.2mol/L?Na₂HPO₄溶液；