[發明專利]一種胃蛋白酶原Ⅰ酶促化學發光檢測試劑盒在審
| 申請號: | 201510268536.6 | 申請日: | 2015-05-22 |
| 公開(公告)號: | CN104965077A | 公開(公告)日: | 2015-10-07 |
| 發明(設計)人: | 王明麗;洪葉;趙俊;劉峰 | 申請(專利權)人: | 必歐瀚生物技術(合肥)有限公司;劉峰 |
| 主分類號: | G01N33/543 | 分類號: | G01N33/543;G01N33/573;G01N21/76 |
| 代理公司: | 安徽合肥華信知識產權代理有限公司 34112 | 代理人: | 余成俊 |
| 地址: | 230088 安徽省合肥市高*** | 國省代碼: | 安徽;34 |
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| 摘要: | |||
| 搜索關鍵詞: | 一種 胃蛋白酶 化學 發光 檢測 試劑盒 | ||
1.一種胃蛋白酶原Ⅰ酶促化學發光檢測試劑盒,其特征在于,該試劑盒包括酶標液、胃蛋白酶原Ⅰ標準品、包被胃蛋白酶原Ⅰ單克隆抗體的免疫磁珠、樣本稀釋液、化學發光底物液、洗滌液。
2.按照權利要求1所述的一種胃蛋白酶原Ⅰ酶促化學發光檢測試劑盒,其特征在于,將胃蛋白酶原Ⅰ單克隆抗體包被在磁珠微球表面,經捕捉樣本中的胃蛋白酶原Ⅰ以及加入酶標胃蛋白酶原Ⅰ單克隆抗體試劑后,形成固相-抗體-抗原-酶標抗體夾心免疫復合物。
3.按照權利要求1所述的一種胃蛋白酶原Ⅰ酶促化學發光檢測試劑盒,其特征在于,所述的包被胃蛋白酶原Ⅰ單克隆抗體的免疫磁珠為含有標記有抗胃蛋白酶原Ⅰ單克隆抗體的磁性微球;
?所述的酶標液中酶標抗體的酶是辣根過氧化物酶;
?所述的洗滌液是含有吐溫-20的緩沖液;
?所述的化學發光底物溶液是酶促化學發光底物溶液。
4.如權利要求1-3任其一所述的試劑盒,其特征在于,所述包被胃蛋白酶原Ⅰ單克隆抗體的免疫磁珠按如下方法制得:
(1)初洗緩沖液的配制:
稱取0.1952g的MES?hygrate于100ml的純水中,調整pH至5.0;
加入50μl吐溫-20,配成0.01mol/L?MES緩沖液,調整pH至5.0;
(2)偶聯緩沖液的配制:
稱取0.38138g?Na2B4O7·10H2O溶于40ml純水中,得到0.05mol/L的硼砂溶液;
稱取0.1237g?H3BO3溶于10ml純水中,得到0.2mol/L的硼酸溶液;
取18ml?0.05mol/L的Na2B4O7溶液與2ml?0.2mol/L的H3BO3溶液混合,定容至80ml得0.05mol/L硼酸緩沖液;
(3)終洗液的配制:
稱取2.78g?Na2HPO4溶于100ml純水得0.2mol/L?Na2HPO4溶液;
稱取1.2g?NaH2PO4溶于50ml純水得0.2mol/L?NaH2PO4溶液;
取81ml?0.2mol/LNa2HPO4溶液與19ml?0.2mol/L?NaH2PO4溶液混合,得0.2mol/L?PB緩沖溶液得0.2mol/LPB緩沖溶液;
取50ml?0.2mol/L?PB緩沖液,2倍稀釋到100ml,加入0.9gNaCl,?0.5g0.5%-1%的BSA,0.02-0.03%生物防腐劑、0.05%吐溫20,充分溶解混勻;
(4)封閉液的配制:
取100ml?Tris緩沖液,將溶液的pH調節成8.5-9.0之間;
向其中加入2%BSA;
(5)?EDC溶液和NHS溶液的配制:
稱取25mg/ml的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺,溶解于1ml的初洗緩沖液中,配制成25mg/ml的EDC溶液;
稱取25mg/ml的N-羥基琥珀酰亞胺溶解于初洗緩沖液中,配置成25mg/ml?NHS溶液;
(6)磁珠包被過程:
A、初洗:取100μl磁珠,將其稀釋成10mg/ml的磁珠濃度,從中吸取100μl;磁分離架上分離,去上清;用初洗液250μl洗滌三次,磁分離,去上清;
B、活化:取初洗完成的磁珠加入150μlMES,再加入50μl?EDC及50μl的NHS溶液,充分混勻;室溫下25℃活化30min,活化完成磁分離去上清,以250μl偶聯緩沖液重懸洗滌三次,分離去上清;
C、稀釋抗G-17單克隆抗體:
將抗G-17單克隆抗體從-20℃冰箱中取出,待其融化后取出20μl,用偶聯緩沖液1:20稀釋到400μl,稀釋后的抗體濃度為0.0397mg/ml;
D、偶聯:
加入400μl用偶聯緩沖液稀釋的抗G-17單克隆抗體重懸活化后的磁珠,充分混勻,其磁珠包被比率為1mg磁珠:0.0159mg抗體;
37℃偶聯2h,37℃搖床搖晃恒溫混勻;
E、封閉:
將偶聯結束的磁珠于磁分離架上分離,去上清;
加入400μl封閉液,37℃搖床封閉1h;
封閉結束后去除上清;
F、終洗保存:
以400μl終洗液洗滌封閉完成的磁珠,重復三次,最終定容到500μl。
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