技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種抗氧化功能營(yíng)養(yǎng)液的制備方法，特別涉及雙酶酶解的方法。

背景技術(shù)

自由基是人體生命活動(dòng)中多種生化反應(yīng)的中間代謝產(chǎn)物之一。人體內(nèi)氧自由基的積累是由于人體內(nèi)生物大分子的降解所致,?而在人體細(xì)胞內(nèi)自由基持續(xù)地產(chǎn)生與積累是導(dǎo)致各種疾病的主要原因，如羥自由基持續(xù)地產(chǎn)生與積累，可直接改變核苷酸、蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)，攻擊不飽和脂肪酸，是導(dǎo)致癌癥、肝炎、帕金森綜合征等疾病的主要原因。自由基清除劑可作為抗氧化物不同程度地清除人體內(nèi)積累的自由基，實(shí)驗(yàn)研究表明，抗氧化劑對(duì)因自由羥基、自由氧基的積累而導(dǎo)致的疾病均具有治療和預(yù)防作用。人工合成抗氧化劑因副作用的影響，其使用受到嚴(yán)格限制；而天然抗氧化劑副作用較小。因此，對(duì)安全無(wú)毒的天然抗氧化物研究與制備備受科學(xué)家們的關(guān)注。

蛋白質(zhì)水解后生成許多小分子肽和氨基酸，不僅有利于人體吸收，還提高了蛋白質(zhì)的利用率，研究發(fā)現(xiàn)蛋白質(zhì)水解后產(chǎn)生的小分子肽具有多種生物活性。目前，蛋白質(zhì)酶解液的制備，多采用單酶水解。但酶的專(zhuān)一性決定了某種蛋白酶只可能作用于某些肽鍵或帶有某種基團(tuán)的氨基酸所形成的肽鍵，單酶水解主要利用端肽酶或內(nèi)肽酶酶解蛋白質(zhì)，不足是酶制劑的用量大，水解度較低。而采用復(fù)合酶，可以根據(jù)不同酶對(duì)肽鍵的酶切位點(diǎn)不同進(jìn)行有針對(duì)性的選擇，從而增加酶切位點(diǎn)，高效酶解牡蠣肉制備抗氧化物。

為了獲得高水解度和高抗氧化活性的混合多肽抗氧化營(yíng)養(yǎng)液，本發(fā)明首次采用無(wú)花果蛋白酶和風(fēng)味蛋白酶復(fù)合處理牡蠣肉，提出雙酶酶解制備抗氧化營(yíng)養(yǎng)液的方法。無(wú)花果蛋白酶，是一種巰基肽鏈內(nèi)切酶，具有巰基蛋白酶的特性，其活性部位含半胱氨酸殘基，優(yōu)先水解酪氨酸及苯丙氨酸殘基，有較強(qiáng)的蛋白水解能力。風(fēng)味蛋白酶是一種以端肽酶為主的復(fù)合型蛋白酶，在水解蛋白質(zhì)時(shí)，主要發(fā)揮端肽酶的作用，從多肽鏈的末端水解多肽。這兩種蛋白酶酶切位點(diǎn)的不同，相互促進(jìn)，一種蛋白酶切斷肽鏈后，為另外一種蛋白酶提供了更多的酶切位點(diǎn)，提高了底物的水解速度，能夠得到較高抗氧化活性的營(yíng)養(yǎng)液。

無(wú)花果蛋白酶和風(fēng)味蛋白酶同時(shí)酶解原料蛋白質(zhì)，由于酶的特異性，兩種蛋白酶相互作用，互相促進(jìn)，從而高效地水解蛋白質(zhì)，得到更多的活性片段。與單酶酶解相比，無(wú)花果蛋白酶和風(fēng)味蛋白酶同時(shí)酶解蛋白質(zhì)，酶解時(shí)間短、能耗低，從而大大降低生產(chǎn)成本，且酶解過(guò)程簡(jiǎn)單方便，易于操作，制備的營(yíng)養(yǎng)液抗氧化活性高。

目前還未有用無(wú)花果蛋白酶和風(fēng)味蛋白酶同時(shí)酶解的方法制備抗氧化物的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種利用雙酶制備牡蠣肉抗氧化功能營(yíng)養(yǎng)液的方法，使得操作簡(jiǎn)便、抗氧化活性高、能耗低、成本低、周期短，并且能獲得較高活性的抗氧化營(yíng)養(yǎng)液。

本發(fā)明的技術(shù)方案是：一種利用雙酶制備牡蠣肉抗氧化功能營(yíng)養(yǎng)液的方法，具體包括以下步驟：

1）預(yù)處理：將新鮮牡蠣經(jīng)過(guò)采肉、去殼、清洗、瀝干、打漿后，得到均漿液，裝袋后置于-20℃凍藏備用；

2）制備酶解底物：取出凍藏均漿液在流動(dòng)自來(lái)水中解凍，調(diào)節(jié)料水比1:2（m/V），攪拌均勻，得酶解底物；

3）酶解：將酶解底物升溫到所需的溫度，加酶進(jìn)行雙酶酶解，酶解工藝參數(shù)為：無(wú)花果蛋白酶與風(fēng)味蛋白酶的質(zhì)量比例5:1～5:1，總酶量（酶占均漿液質(zhì)量百分比）4?%～12?%，酶解初始pH為5.5～7.5，酶解溫度45℃~55?℃，酶解時(shí)間2～6?h；

4）滅酶：酶解完成，將酶解液在恒溫100?℃下滅酶處理；

5）冷卻：將滅酶完畢的酶解液進(jìn)行水浴冷卻；

6）離心：將冷卻后的酶解液在轉(zhuǎn)速6000?r/min下進(jìn)行離心，收集上清液，即成。

本發(fā)明的有益效果是：與之前的牡蠣肉酶解方法相比，本發(fā)明首次將無(wú)花果蛋白酶和風(fēng)味蛋白酶相結(jié)合酶解牡蠣肉，充分利用無(wú)花果蛋白酶和風(fēng)味蛋白酶酶切位點(diǎn)的不同，兩種蛋白酶相互作用，互相促進(jìn)，一種蛋白酶切斷肽鏈后，為另外一種蛋白酶提供了更多的酶切位點(diǎn)，從而高效地水解蛋白質(zhì)，既縮短了提取時(shí)間，又能得到較高抗氧化活性的營(yíng)養(yǎng)液。本發(fā)明提供的抗氧化功能營(yíng)養(yǎng)液的雙酶制備方法也同樣適用于其它貝類(lèi)的加工，是一項(xiàng)有效開(kāi)發(fā)我國(guó)豐富的海產(chǎn)、淡水貝類(lèi)資源，提高我國(guó)海產(chǎn)、淡水貝類(lèi)資源經(jīng)濟(jì)價(jià)值的切實(shí)可行的技術(shù)方法。

具體實(shí)施方式???

以下以具體實(shí)施例來(lái)說(shuō)明本發(fā)明的技術(shù)方案。

實(shí)施例1