本發明涉及在用于檢測樣品中包含兩個或多個類似或相同表位的多表位靶分析物和/或用于確定樣品中多表位靶分析物的濃度的測試中防止檢測顆粒聚集的方法，其中所述方法包括應用能夠特異性結合到多表位分析物上的至少一個表位的第一捕獲實體的步驟，其特征在于所述第一捕獲實體阻斷至少一個表位結合到檢測顆粒。本發明進一步涉及其中多表位靶分析物的檢測包括使用第二捕獲實體的方法，所述第二捕獲實體可以如第一捕獲實體那樣特異性結合到多表位靶分析物的相同或相似表位。還預期到用于檢測所述多表位靶分析物的方法，該方法在包括傳感器表面的系統中的執行并且使用第一捕獲實體以阻斷至少一個表位結合到檢測顆粒，諸如磁檢測顆粒。

技術領域

本發明涉及在用于檢測樣品中包含兩個或多個類似或相同表位的多表位靶分析物和/或用于確定樣品中多表位靶分析物的濃度的測試中防止檢測顆粒聚集的方法，其中所述方法包括應用能夠特異性結合到多表位分析物上的至少一個表位的第一捕獲實體的步驟，其特征在于所述第一捕獲實體阻斷至少一個表位結合到檢測顆粒。本發明進一步涉及其中多表位靶分析物的檢測包括使用第二捕獲實體的方法，所述第二捕獲實體可以如第一捕獲實體那樣特異性結合到多表位靶分析物的相同或相似表位。還預期到用于檢測所述多表位靶分析物的方法，在包括傳感器表面的系統中執行該方法以及使用第一捕獲實體以阻斷至少一個表位結合到檢測顆粒，諸如磁檢測顆粒。

背景技術

對普遍且有效的醫療護理的需求使得體外診斷學的世界朝向集成隨機訪問和床旁護理(point-of care)解決方案發展。此類解決方案的實現要求較高：測試需要是快速、靈敏、定量且準確的。此外，在其上執行測試的平臺需要易于使用且簡潔。

親和力測定使用生物分子來從樣品中捕獲特異性靶分子并且允許確定其濃度。通常，通過將涂敷有捕獲分子的納米顆粒或微粒分散至樣品流體中來實現親和力捕獲(Luchini 等人, 2008, Nano Lett., 8(1), 350 - 361)。因此，典型的基于親和力的測定在海量應用中使用，諸如診斷學測定、在研究中檢測生物分子，諸如蛋白、肽和核酸，由此使用親和分子，諸如例如抗體，其通常通過對特定生物分子的高結合親和力來表征。原則上，官能化的顆粒，例如磁顆粒，被吸引至傳感器表面，在那里顆粒可以間接（即借助于捕獲的分析物）或直接結合到捕獲探針，諸如印刷在表面上的抗體。結合的顆粒數目與樣品中存在的靶分子的數量正相關或反相關。通常，在此類生物傳感器應用中，可以使用對接近表面的顆粒靈敏的任何技術來檢測顆粒；通常此類技術基于光學檢測，諸如檢測散射光或受抑全內反射（FTIR），如例如Bruls 等人, Lab Chip, 2009, 9. 2504-3510中所述。

然而，如現有技術中描述的此類親和力測定的重要缺點是這一事實，即在靶分子以多聚形式存在或提供大量相似或相同表位的情況下，多個顆粒可以結合到同一靶分子，其可導致形成珠粒-靶聚集體，即以群聚。這可能顯著減低顆粒（例如磁顆粒）的數目，所述顆粒可能與表面緊密接觸并且因此可能降低測定的靈敏度。此外，此類聚集過程可以以不可重現的方式發生，因此導致測定結果不準確。

因此，存在提供在多聚或多表位靶分子存在的情況下防止顆粒群聚的手段和方法的需求。

發明內容

本發明針對這些需求并且提供在多聚或多表位靶分子存在的情況下防止顆粒群聚的手段和方法。上述目標具體通過在用于檢測樣品中包含兩個或多個相似或相同表位的多表位靶分析物和/或用于確定樣品中所述多表位靶分析物的濃度的測試中防止檢測顆粒聚集的方法來實現，其中所述方法包括應用能夠特異性結合到所述多表位分析物上的至少一個表位的第一捕獲實體的步驟，其特征在于所述第一捕獲實體阻斷至少一個表位結合到檢測顆粒。此類第一捕獲實體的采用導致大部分相似或相同表位覆蓋在靶分析物上并且僅留下一小部分或單一表位。這些少數表位是自由的并且可以隨后或同時通過能夠與檢測顆粒相互作用的另外捕獲實體而結合。由此，有效地防止以其他方式幾乎不可避免的檢測顆粒的群聚。這導致測定或相應的檢測方法的靈敏度的顯著增加，并且還改進測定/檢測方法的再現性，因而增加測定/檢測方法準確性。