對序列表的引用

本申請包含一個計算機可讀形式的序列表，將其通過引用結(jié)合在此。

發(fā)明背景

發(fā)明領(lǐng)域

本發(fā)明涉及具有磷脂酶A活性的多肽和編碼這些多肽的多核苷酸。本發(fā)明還涉及包括這些多核苷酸的核酸構(gòu)建體、載體以及宿主細(xì)胞連同產(chǎn)生和使用這些多肽的方法。

相關(guān)技術(shù)說明

已從大量的有機體中分離出了磷脂酶，例如動物、植物、細(xì)菌、真菌。

來自黑曲霉的脂肪酶(UNIPROT：B8YIE6)具有一種氨基酸序列，該氨基酸序列與本發(fā)明的磷脂酶具有70％的一致性。

具有A1活性的磷脂酶已經(jīng)由諾維信A/S公司以LECITASEULTRA向公眾開放(楊(Yang)等人，食品技術(shù)和生物技術(shù)(FoodTechnol.Biotechnol.)，44(1)101-104(2006))。

本領(lǐng)域已知磷脂酶的數(shù)個用途，例如將磷脂酶用于，例如植物油的酶法脫膠(楊(Yang)等人，見上文；US5,264,367，Metallgesellschaft，)；淀粉水解產(chǎn)物的處理(特別是來自小麥淀粉)以改善濾過率(EP219,269，CPC國際)；作為一種面包面團的添加劑以改善面團和面包的特性(US4,567,046，協(xié)和發(fā)酵(KyowaHakko))；并且用于制備具有特殊的乳化性能的溶血卵磷脂。

可以將磷脂酶應(yīng)用于植物油的脫膠以提供具有適于消費的中性味道和淺色的精煉貯存穩(wěn)定的植物油。脫膠過程包括去除磷脂化合物，該磷脂化合物又稱磷脂類或來自富含三酸甘油脂的油級分的“膠”。

傳統(tǒng)上，脫膠過程基于水萃取，用酸處理或腐蝕性處理，隨后經(jīng)過分離過程。由于磷脂類的乳化性，脫膠流程導(dǎo)致了油的損失，即，甘油三酯的損失。然而，酶法脫膠已經(jīng)變得越來越普遍。酶法脫膠是在已經(jīng)進(jìn)行過了水脫膠的油上以及在粗油上進(jìn)行。在食用油的水脫膠過程中，磷脂類的一部分被留在該油中。那部分用通用術(shù)語“非水化磷脂類”(NHP)來描述。在生產(chǎn)油的過程中，去除NHP含分是必不可少的(US5264367)。在酶法脫膠過程中，通過使用磷脂酶將NHP轉(zhuǎn)化為溶于水的并且水可提取的組分。

針對植物油的工業(yè)脫膠應(yīng)用最廣泛的商業(yè)酶是來自諾維信A/S公司的磷脂酶LECITASEULTRA(楊(Yang)等人，見上文)。LECITASEULTRA具有相對高的熱穩(wěn)定性；然而，其最適合用于溫度最高不超過55℃的脫膠過程。

一般通過使用酸性的和腐蝕性的化學(xué)品協(xié)助酶法脫膠。在初始脫膠步驟中，通過將金屬與檸檬酸鹽螯合，檸檬酸或磷酸的添加改善了磷脂的鹽形式的水合性。在以下酶促反應(yīng)中，pH經(jīng)常需要被部分中和(典型地通過添加氫氧化鈉)以適應(yīng)所應(yīng)用的酶的pH需要。當(dāng)使用磷脂酶LECITASEULTRA時，針對此反應(yīng)的最適pH為在5.0和5.5之間(參見申請表“植物油的精煉-改善脫膠產(chǎn)率(Refiningofvegetableoils-Improvingdegummingyield)”)。然而，在此pH范圍內(nèi)，在酶促反應(yīng)期間所釋放的鈣和/或鎂與用來控制反應(yīng)條件的緩沖液或螯合酸結(jié)合，典型地導(dǎo)致鹽形成并且導(dǎo)致因檸檬酸鈣和檸檬酸鎂的鹽的沉淀的設(shè)備污染(US7,713,727)。如果酶促反應(yīng)可以在較低pH下進(jìn)行由此減少用于中和所使用的酸將是有利的。

對于提供具有改善性質(zhì)的新穎磷脂酶是一直存在的需要的，例如在高溫和/或低pH下提高活性。本發(fā)明涉及具有磷脂酶A活性的此類新穎的多肽和編碼這些多肽的多核苷酸。

發(fā)明概述

本發(fā)明人已經(jīng)鑒定出了一種來自嗜熱籃狀菌(Talaromycesleycettanus)菌株CBS398.68的具有磷脂酶A活性的新型多肽。本發(fā)明的多肽示出了在高溫下的高熱穩(wěn)定性和/或提高的活性。因為它允許在較高溫度下進(jìn)行工業(yè)過程，這是一種優(yōu)點。在酶法脫膠中，較高的溫度可以提高存在于油中的磷脂類的酶法脫膠的速度，有助于在磷脂類的酶法降解后的油相和水相的分離，和/或降低油的粘度-所有以上這些導(dǎo)致較短的加工時間以及油脂精煉設(shè)備的較高物料通過量。

此外，本發(fā)明的多肽在低pH下具有出乎意料高的活性，這是一種優(yōu)點，即，在植物油的酶法脫膠中，其中pH調(diào)節(jié)的需要被降低，導(dǎo)致工藝設(shè)備的沉淀的較少的沉積并且因此節(jié)省了所減少使用的化學(xué)品連同降低了用于清潔的時間。

多肽對大多數(shù)磷脂具有活性，包括磷脂酸(PA)、磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酰肌醇(PI)、和磷脂酰膽堿(PC)。