[發明專利]產氣莢膜梭菌腸毒素陽性菌雙重熒光定量PCR快速檢測試劑盒有效
| 申請號: | 201410821981.6 | 申請日: | 2014-12-25 |
| 公開(公告)號: | CN104531867A | 公開(公告)日: | 2015-04-22 |
| 發明(設計)人: | 張蓉蓉;艾地云;張騰飛;羅青平;邵華斌;溫國元;王紅琳;汪宏才;羅玲 | 申請(專利權)人: | 湖北省農業科學院畜牧獸醫研究所 |
| 主分類號: | C12Q1/68 | 分類號: | C12Q1/68;C12Q1/04 |
| 代理公司: | 湖北武漢永嘉專利代理有限公司 42102 | 代理人: | 崔友明 |
| 地址: | 430064 湖*** | 國省代碼: | 湖北;42 |
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| 摘要: | |||
| 搜索關鍵詞: | 莢膜 梭菌腸 毒素 陽性 雙重 熒光 定量 pcr 快速 檢測 試劑盒 | ||
1.產氣莢膜梭菌腸毒素陽性菌雙重熒光定量PCR快速檢測試劑盒,其特征在于該試劑盒包括:a)熒光定量反應液、b)產氣莢膜梭菌外毒素cpa陽性和產氣莢膜梭菌腸毒素cpe陽性質控品、c)陰性質控品;其中熒光定量反應液包含有引物2對和探針1對,為產氣莢膜梭菌外毒素cpa的上游引物cpa01和下游引物cpa02以及熒光探針cpap;產氣莢膜梭菌腸毒素cpe的上游引物cpe01和下游引物cpe02以及熒光探針cpep,其中,
產氣莢膜梭菌外毒素cpa的引物序列為:
上游引物cpa01:5’-GATTTGTAAGGCGCTTATTTGT-3’,
下游引物cpa02:5’-ATAGCATGAGTTCCTGTTCCA-3’,
熒光探針cpap:5’-CTACGCTAGCAACTAGCCTATGGGCTG-3’,探針上游5’端標記的熒光報告基因是TAMRA,3’端標記的熒光淬滅基團是BHQ-2;
產氣莢膜梭菌腸毒素cpe的引物序列為:
上游引物cpe01:5’-AGTGTAAATTAAGCTTTTGAGTCCA-3’,
下游引物cpe02:5’-TAGCTGCTGCTACAGAAAGATTAA-3’,
熒光探針cpep為5’-AAGGGTATGAGTTAGAAGAACGCCAATCA-3’,探針上游5’端標記的熒光報告基因是FAM,3’端標記的熒光淬滅基團是BHQ-1。
2.按權利要求1所述的產氣莢膜梭菌腸毒素陽性菌雙重熒光定量PCR快速檢測試劑盒,其特征在于所述的熒光定量反應液由1×PCR?buffer(含Mg2+),dNTPs?0.5mM,Taq酶2U,產氣莢膜梭菌外毒素cpa的上游引物cpa01和下游引物cpa02各0.4μM,熒光探針cpap為0.4μM,產氣莢膜梭菌腸毒素cpe的上游引物cpe01和下游引物cpe02各0.4μM,熒光探針cpep為0.4μM組成。
3.按權利要求1所述的產氣莢膜梭菌腸毒素陽性菌雙重熒光定量PCR快速檢測試劑盒,其特征在于所述的產氣莢膜梭菌外毒素cpa陽性和產氣莢膜梭菌腸毒素cpe陽性質控品為含有α毒素和cpe序列的克隆質粒,其中產氣莢膜梭菌外毒素cpa的陽性質控品為構建的載體pUC57-cpa,其序列為:ATGAA?AAGAA?AGATT?TGTAA?GGCGC?TTATT?TGTGC?TACGC?TAGCA?ACTAG?CCTAT?GGGCT?GGGGC?ATCAA?CTAAA?GTCTA?CGCTT?GGGAT?GGAAA?GATTG?ATGGA?ACAGG?AACTC?ATGCT?ATGAT?TG;
產氣莢膜梭菌腸毒素cpe陽性質控品為合成的長鏈構建的載體pUC57-cpe,其序列為AGATA?TAGAA?AAAGA?AATCC?TTGAT?TTAGC?TGCTG?CTACA?GAAAG?ATTAA?ATTTA?ACTGA?TGCAT?TAAAC?TCAAA?TCCAG?CTGGT?AATTT?ATATG?ATTGG?CGTTC?TTCTA?ACTCA?TACCC?TTGGA?CTCAA?AAGCT?TAATT?TACAC?TTAAC?AATTA?CAGCT?ACTGG?ACAAA?AATAT?AGAAT?CTTAG?CTAGC?AAAAT?TGTTG?ATTTT?AATAT?TTATT?CAAAT?AATTT?TAATA?ATCTA?GTGAA?ATT。
4.按權利要求1所述的產氣莢膜梭菌腸毒素陽性菌雙重熒光定量PCR快速檢測試劑盒,其特征在于所述的陰性質控品是滅菌的無酶雙蒸水。
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