技術領域

本發明涉及細胞增殖檢測領域，特別涉及一種非診斷目的檢測淋巴細胞增殖情況的方法及其試劑盒。

背景技術

原發免疫缺陷病(Primary?immunodeficiency?disease，PID)系因相關基因突變導致免疫細胞或其組成成分量或質的變化，導致機體對多種病原體易感性顯著增高的疾病。迄今已發現的約200多種PID中，已有200余個基因突變被明確。而免疫功能評估對PID的診斷及預后具有重要意義。一方面，已經基因確診的PID患兒進行免疫功能評估有助于判斷患兒的病情嚴重程度，指導臨床用藥，為臨床治療以及造血干細胞移植提供參考意見；另一方面，對疑診的PID患兒進行免疫功能評估可以為診斷提供線索，并為下一步基因篩查及診斷治療提供幫助。免疫功能的初步評估通常運用全血細胞計數，總的和特異的免疫球蛋白水平測定，聯合分析補體系統，評估淋巴細胞不同亞群的數量。但是這些檢測指標還不夠，因為PID的臨床表現不一定是由于細胞數量的減少導致，而是跟細胞功能的缺失有關。

淋巴細胞增殖和分化是機體免疫應答過程的一個重要階段。因此，檢測淋巴細胞增殖水平是細胞免疫研究和臨床免疫功能檢測的一種常用方法。目前，檢測淋巴細胞增殖水平的方法主要包括形態學觀察法、放射性核素(3H-TdR,125I-UdR)摻入法、核苷類似物(BrDU)溴脫氧尿苷摻入法、細胞能量代謝測定(MTT比色法)和CFSE(羧基熒光素乙酰酸琥珀酰亞胺酯)染色流式測定法：

(一)形態學觀察法

形態學觀察法是依據淋巴母細胞轉化的形態學特征，借助光學顯微鏡進行檢測。但其存在多種不足，主要體現在：用形態觀察的方法判斷淋巴細胞增殖情況，準確性較差；該法只能分析總的淋巴細胞的增殖情況，無法判斷淋巴細胞亞群的增殖情況；需要分離外周血單個核細胞(PBMC)，血標本量要求較大(通常>4mL)，在小年齡患者中收集標本更困難；該法只能計算淋巴細胞增殖比例，不能得到細胞增殖的絕對值。

(二)放射性核素(3H-TdR,125I-UdR)摻入法

放射性核素(3H-TdR,125I-UdR)摻入法是指增殖的細胞其新合成DNA需攝取核苷酸原料，故可用核素標記的核苷酸參與反應，通過測定放射性強度以反映淋巴細胞增殖水平。其不足之處包括：標記為放射性核素，存在放射性污染危險；該法只能分析總的淋巴細胞的增殖情況，無法判斷淋巴細胞亞群的增殖情況；需要分離PBMC，血標本量要求較大(通常>4mL)，在小年齡患者中收集標本更困難；該法只能計算淋巴細胞增殖比例，不能得到細胞增殖的絕對值。

(三)核苷類似物(BrDU)溴脫氧尿苷摻入法

核苷類似物(BrDU)溴脫氧尿苷摻入法的原理同放射性核素摻入法的原理近似，其不足之處包括：該法敏感度不高；該法只能分析總的淋巴細胞的增殖情況，無法判斷淋巴細胞亞群的增殖情況；需要分離PBMC，血標本量要求較大(通常>4mL)，在小年齡患者中收集標本更困難；該法只能計算淋巴細胞增殖比例，不能得到細胞增殖的絕對值。

(四)細胞能量代謝測定(MTT比色法)

細胞能量代謝測定(MTT比色法)是指活細胞內有活性的線粒體作用于噻唑藍(MTT)，可生產藍黑色甲替產物，其生成量與細胞代謝活躍程度呈正相關，由此間接定量分析細胞增殖水平。其不足之處包括：該法為間接評估淋巴細胞增殖狀況的方法，是通過計算活細胞的比率，而非直接檢測分裂的細胞數；該法只能分析總的淋巴細胞的增殖情況，無法判斷淋巴細胞亞群的增殖情況；需要分離PBMC，血標本量要求較大(通常>4mL)，在小年齡患者中收集標本更困難；該法只能計算淋巴細胞增殖比例，不能得到細胞增殖的絕對值。

(五)CFSE(羧基熒光素乙酰酸琥珀酰亞胺酯)染色流式測定法