[發明專利]一種非診斷目的檢測淋巴細胞增殖情況的方法及其試劑盒在審
| 申請號： | 201410786994.4 | 申請日： | 2014-12-17 |
| 公開（公告）號： | CN104458539A | 公開（公告）日： | 2015-03-25 |
| 發明（設計）人： | 趙曉東;秦濤 | 申請（專利權）人： | 重慶醫科大學附屬兒童醫院 |
| 主分類號： | G01N15/10 | 分類號： | G01N15/10;G01N33/58 |
| 代理公司： | 北京集佳知識產權代理有限公司 11227 | 代理人： | 趙青朵 |
| 地址： | 400014 *** | 國省代碼： | 重慶;85 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 診斷 目的 檢測 淋巴細胞 增殖 情況 方法 及其 試劑盒 | ||
1.一種非診斷目的檢測淋巴細胞增殖情況的方法，其特征在于，包括如下步驟：
將第一待測血液樣本與淋巴細胞多克隆激活劑混合，經細胞培養，獲得第一血液細胞；將熒光標記的淋巴細胞表面標記抗體與所述第一血液細胞進行孵育，裂解紅細胞，加入絕對計數用微球，采用流式細胞術檢測淋巴細胞數量和絕對計數用微球數量，根據所述淋巴細胞數量、所述絕對計數用微球數量和絕對計數用微球濃度獲得刺激組淋巴細胞的濃度；
將第二待測血液樣本進行細胞培養，獲得第二血液細胞；將熒光標記的淋巴細胞表面標記抗體與所述第二血液細胞進行孵育，裂解紅細胞，加入絕對計數用微球，采用流式細胞術檢測淋巴細胞數量和絕對計數用微球數量，根據所述淋巴細胞數量、所述絕對計數用微球數量和絕對計數用微球濃度獲得未刺激組淋巴細胞的濃度；
比較所述刺激組淋巴細胞的濃度與所述未刺激組淋巴細胞的濃度，獲得淋巴細胞增殖情況；
所述第一待測血液樣本與所述第二待測血液樣本的來源相同。
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述淋巴細胞表面標記抗體為T淋巴細胞表面標記抗體和/或B淋巴細胞表面標記抗體。
3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，所述T淋巴細胞表面標記抗體為CD3抗體、CD8抗體、CD45抗體、CD4抗體、CD14抗體或CD15抗體中的一種或兩者以上的混合物。
4.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，所述B淋巴細胞表面標記抗體包括CD3抗體、CD45抗體、CD19抗體、CD14抗體或CD15抗體中的一種或兩者以上的混合物。
5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述淋巴細胞多克隆激活劑為PWM或PHA。
6.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述待測血液樣本的用量不大于300μL。
7.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述細胞培養具體為在35℃～40℃、4～6％CO2的條件下培養5～10天。
8.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述孵育具體為：在20℃～30℃避光條件下孵育10～30min。
9.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述裂解所用的試劑為溶血素。
10.一種檢測淋巴細胞增殖情況的試劑盒，其特征在于，包括淋巴細胞多克隆激活劑、熒光標記的淋巴細胞表面標記抗體，溶血素、絕對計數用微球和抗凝劑。
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