[發(fā)明專(zhuān)利]一種用于精子DNA完整性檢測(cè)的精子凍存與復(fù)融方法無(wú)效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201410723087.5 | 申請(qǐng)日: | 2014-12-03 |
| 公開(kāi)(公告)號(hào): | CN104396945A | 公開(kāi)(公告)日: | 2015-03-11 |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人: | 張麗紅;王秋菊;蓋凌;劉蓓;許觀(guān)照;張偉;孫林;李希合;王琳琳;蔣寶宏;王洪巖 | 申請(qǐng)(專(zhuān)利權(quán))人: | 張麗紅 |
| 主分類(lèi)號(hào): | A01N1/02 | 分類(lèi)號(hào): | A01N1/02;C12Q1/68 |
| 代理公司: | 暫無(wú)信息 | 代理人: | 暫無(wú)信息 |
| 地址: | 250002 山*** | 國(guó)省代碼: | 山東;37 |
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| 摘要: | |||
| 搜索關(guān)鍵詞: | 一種 用于 精子 dna 完整性 檢測(cè) 方法 | ||
1.一種用于精子DNA完整性檢測(cè)的精子凍存與復(fù)融方法,其特征在于:包括以下步驟:
(1)將剛?cè)〕龅幕颊呔毫⒓摧p輕吹打,取一麥管,先吸入5mm的緩沖液,再吸入2mm的空氣,然后吸入精液0.5ml,然后再吸入2mm的空氣,再吸入5mm的緩沖液,用加熱法將麥管的液體進(jìn)入端密封,然后將連接吸管端用木簽密封,然后裝入冷凍試管內(nèi),旋緊冷凍試管螺紋蓋,裝入紗袋中,立即投入液氮罐中進(jìn)行冷凍;
(2)進(jìn)行精子DNA完整性檢測(cè)前,將冷凍試管從液氮中取出,立即放入37℃水浴中,30秒后取出,擰開(kāi)試管螺紋蓋,取出麥管,剪掉采用加熱法密封的密封端,并將此端對(duì)準(zhǔn)離心管,拔掉另一端的木簽,將精液從木簽端采用吸管吹入離心管;按體積比1∶1的比例加入精子DNA保護(hù)緩沖液,混勻,洗滌精子,然后進(jìn)行常規(guī)的精子DNA完整性檢測(cè)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于精子DNA完整性檢測(cè)的精子凍存與復(fù)融方法,其特征在于:所述冷凍試管的結(jié)構(gòu)為:包括管體,管體頂部設(shè)有螺紋蓋,管體底部設(shè)有鋼塊,管體的管壁上設(shè)有多個(gè)小孔。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的用于精子DNA完整性檢測(cè)的精子凍存與復(fù)融方法,其特征在于:所述冷凍試管長(zhǎng)25cm,內(nèi)徑1.5cm,管壁厚度為0.05cm,管壁上遍布直徑為0.2cm的小孔。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的用于精子DNA完整性檢測(cè)的精子凍存與復(fù)融方法,其特征在于:所述冷凍試管的管體的材質(zhì)為聚丙烯材料。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于精子DNA完整性檢測(cè)的精子凍存與復(fù)融方法,其特征在于:所述精子DNA保護(hù)緩沖液是通過(guò)以下方法制備得到的:取8.5克氯化鈉、2.2克磷酸氫二鈉以及0.2克磷酸二氫鈉,溶解于蒸餾水中,定容至1000毫升,調(diào)pH值為7.4,即為pH7.4的磷酸緩沖液;取300μl吐溫-20以及0.1克維生素C,加入100毫升磷酸緩沖液中,混勻,即為精子DNA保護(hù)緩沖液。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于精子DNA完整性檢測(cè)的精子凍存與復(fù)融方法,其特征在于:所述洗滌精子的方法如下:凍存復(fù)融精液和精子DNA保護(hù)緩沖液混勻后,置于10毫升離心管中,以2500轉(zhuǎn)/分轉(zhuǎn)速離心5分鐘,棄上清,再加2毫升精子DNA保護(hù)緩沖液,混勻,制成精子懸液,待測(cè)。
7.一種用于精子DNA完整性檢測(cè)的精子凍存的冷凍試管,其特征在于:所述冷凍試管的結(jié)構(gòu)為:包括管體,管體頂部設(shè)有螺紋蓋,管體底部設(shè)有鋼塊,管體的管壁上設(shè)有多個(gè)小孔。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的冷凍試管,其特征在于:所述冷凍試管的管體長(zhǎng)25cm,內(nèi)徑1.5cm,管壁厚度為0.05cm,管壁上遍布直徑為0.2cm的小孔。
9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的冷凍試管,其特征在于:所述冷凍試管的管體的材質(zhì)為聚丙烯材料。
10.一種用于精子DNA完整性檢測(cè)的精子復(fù)融的精子DNA保護(hù)緩沖液,其特征在于:是通過(guò)以下方法制備得到的:取8.5克氯化鈉、2.2克磷酸氫二鈉以及0.2克磷酸二氫鈉,溶解于蒸餾水中,定容至1000毫升,調(diào)pH值為7.4,即為pH7.4的磷酸緩沖液;取300μl吐溫-20以及0.1克維生素C,加入100毫升磷酸緩沖液中,混勻,即為精子DNA保護(hù)緩沖液。
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