偷拍一区二区三区_亚洲欧美日韩偷拍_亚洲第一免费网站_99精品视频在线免费观看_久久亚洲精品国产_国产成人无码一二三区视频_欧美激情xxxxx_国产精品毛片高清在线完整版_一色道久久88加勒比一_一区二区欧美久久_五月婷婷六月婷婷_国产精品成人久久久久

[發明專利]促進水牛卵母細胞體外成熟的方法在審

專利信息
申請號: 201410614012.3 申請日: 2014-11-04
公開(公告)號: CN104312971A 公開(公告)日: 2015-01-28
發明(設計)人: 張明;李敏玲;陳富美 申請(專利權)人: 廣西大學
主分類號: C12N5/075 分類號: C12N5/075;C12N5/073
代理公司: 廣西南寧公平專利事務所有限責任公司 45104 代理人: 楊立華
地址: 530004 廣西壯族*** 國省代碼: 廣西;45
權利要求書: 查看更多 說明書: 查看更多
摘要:
搜索關鍵詞: 促進 水牛 細胞 體外 成熟 方法
【權利要求書】:

1.一種促進水牛卵母細胞體外成熟的方法,其特征在于在水牛卵母細胞體外成熟培養液中添加EGCG。

2.根據權利要求1所述的促進水牛卵母細胞體外成熟的方法,其特征在于:所述EGCG在成熟培養液中的濃度為10μmol/L。

3.根據權利要求2所述的促進水牛卵母細胞體外成熟的方法,其特征在于:所述成熟培養液的組成為TCM199+26.2mmol/L?NaHCO3+5mmol/L?Hepes+10%發情牛血清+3%黃牛卵泡液+0.5μg/mL?FSH+5μg/mL?LH+10μmol/L?EGCG,pH為7.2~7.4。

4.根據權利要求3所述的促進水牛卵母細胞體外成熟的方法,其特征在于包括以下步驟:

(1)卵母細胞的收集

采集屠宰水牛后的廢棄卵巢,置于含0.024g/L青霉素和0.02g/L鏈霉素的生理鹽水的保溫瓶中,溫度保持在35℃,并于6h內送回實驗室;用手術剪將卵巢周圍的其它組織剪去,生理鹽水洗滌2~3遍,用18號針頭注射器抽取2~8mm卵泡的卵母細胞卵泡液復合物,洗卵液中挑選胞質均勻、周圍有3層以上顆粒細胞完全包裹的卵丘-卵母細胞復合體;

所述洗卵液的組成為TCM199+5mmol/L?NaHCO3+20mmol/L?Hepes+600mg/L青霉素和100mg/L鏈霉素,pH為7.2~7.4;

(2)卵母細胞的成熟

用預先平衡好的含10μmol/L?EGCG的成熟培養液做若干個培養滴,每個滴55μL,將收集到的卵母細胞用含10μmol/L?EGCG的成熟培養液中清洗2~3遍,后置于成熟培養液微滴中,每個滴放20個的卵母細胞,覆蓋礦物油置于培養箱中培養,培養條件為39℃,5%CO2和100%濕度;成熟培養后檢查第一極體排出情況,統計成熟率;

所述成熟培養液的組成為TCM199+26.2mmol/L?NaHCO3+5mmol/L?Hepes+10%發情牛血清+3%黃牛卵泡液+0.5μg/mL?FSH+5μg/mL?LH+10μmol/L?EGCG,pH為7.2~7.4。

5.根據權利要求4所述的促進水牛卵母細胞體外成熟的方法,其特征在于還包括以下步驟:

(3)成熟卵母細胞的體外受精

體外受精所用精液為冷凍精液,38.5℃水浴解凍,上游法收集活力高的精子;卵母細胞成熟22~24h后,吹打去除COCs周圍的顆粒細胞,卵母細胞用體外受精液洗滌兩次后置于約40μL的受精滴中,每滴約15~20個,每個受精滴注入12μL離心處理好的精液,使其濃度達到1~2×106個/mL,置于培養箱中進行受精培養;受精后第二天將假定受精卵移入單層顆粒細胞中共培養,隔天更換一半胚胎培養液,受精后48h統計卵裂率,第6~9天統計囊胚率;

所述體外受精液的組成為Tyrode’s液+20μg/mL?Heparin?Sodium+2.0mmol/L?Caffeine+6.0mg/mL?BSA,pH7.5~7.8。

6.根據權利要求4所述的促進水牛卵母細胞體外成熟的方法,其特征在于還包括以下步驟:

(4)成熟卵母細胞的孤雌激活

采用化學激活法,卵母細胞成熟22~24h后,吹打去除COCs周圍的顆粒細胞,卵母細胞用添加了5μmol/L離子酶素的洗卵液中激活5min,后置于6-DMAP培養液中培養6h,6-DMAP培養液為胚胎培養液中添加2mmol/L的6-DMAP;用胚胎培養液洗滌2~3次,置于單層顆粒微滴中共培養,隔天更換一半胚胎培養液,激活48h后統計卵裂率,第6~9天統計囊胚率。

7.根據權利要求5或6所述的促進水牛卵母細胞體外成熟的方法,其特征在于還包括以下步驟:

(5)胚胎培養

體外受精或孤雌激活后的卵母細胞用胚胎培養液洗滌2~3次后,移入顆粒細胞單層培養液微滴中培養,體外培養時間為8天,共培養24h統計卵裂率,第8d統計囊胚率;

所述胚胎培養液的組成為54%體外受精液+36%成熟培養液+10%胎牛血清。

下載完整專利技術內容需要扣除積分,VIP會員可以免費下載。

該專利技術資料僅供研究查看技術是否侵權等信息,商用須獲得專利權人授權。該專利全部權利屬于廣西大學,未經廣西大學許可,擅自商用是侵權行為。如果您想購買此專利、獲得商業授權和技術合作,請聯系【客服

本文鏈接:http://www.17sss.com.cn/pat/books/201410614012.3/1.html,轉載請聲明來源鉆瓜專利網。

×

專利文獻下載

說明:

1、專利原文基于中國國家知識產權局專利說明書;

2、支持發明專利 、實用新型專利、外觀設計專利(升級中);

3、專利數據每周兩次同步更新,支持Adobe PDF格式;

4、內容包括專利技術的結構示意圖流程工藝圖技術構造圖

5、已全新升級為極速版,下載速度顯著提升!歡迎使用!

請您登陸后,進行下載,點擊【登陸】 【注冊】

關于我們 尋求報道 投稿須知 廣告合作 版權聲明 網站地圖 友情鏈接 企業標識 聯系我們

鉆瓜專利網在線咨詢

周一至周五 9:00-18:00

咨詢在線客服咨詢在線客服
tel code back_top
国产精品久久久久久久久免费桃花| 国产久一一精品| 国产精品美女久久久久aⅴ| 亚洲日本青草视频在线怡红院| 日韩欧美国产中文字幕| 国产婷婷色综合av蜜臀av | 偷拍亚洲欧洲综合| 欧美精品一区二区三区蜜桃| 国内精品视频久久| 免费国产一区二区| 污视频网址在线观看| 久久精品xxx| 自拍偷拍视频亚洲| 精品国产九九九| www久久精品| 制服丝袜亚洲网站| 国产精品99久久久久久人 | 久久精品国产久精国产| 亚洲同性gay激情无套| 欧美精品久久久久久久| 色一情一乱一伦一区二区三欧美 | 欧美人伦禁忌dvd放荡欲情| 欧美日韩国产123| 午夜精品短视频| 久久久久久久久影院| 精一区二区三区| 欧美这里有精品| 91精品国产色综合久久不卡98口| 午夜老司机精品| 天码人妻一区二区三区在线看 | 99久久自偷自偷国产精品不卡| 黄色免费视频大全| 国产在线观看免费av| 久久国产视频网| 日韩网站免费观看| 日韩精品不卡| 99久久99久久精品免费| 快she精品国产999| 在线视频一区二区三| 美女被啪啪一区二区| 一级成人黄色片| 欧美日韩亚洲综合| 91视频免费进入| 在线免费看黄色片| 五月天婷婷激情网| 欧美日韩在线三级| 国产精品igao激情视频| 日本中文字幕免费| 国产精品欧美综合在线| 国产色视频一区| 国产精品久久久久久亚洲av| av不卡在线观看| 中文字幕日韩av电影| 亚洲一区二区三区色| 青青草原免费观看| 国产欧美视频一区二区| 久久91精品国产| jlzzjizz在线播放观看| 蜜桃精品在线观看| 日韩欧美国产小视频| www.成人三级视频| 成年人视频免费| 一区二区三区中文在线| 91高清视频在线免费观看| japanese中文字幕| 午夜激情一区二区三区| 91影视免费在线观看| 久久精品一卡二卡| 北条麻妃在线一区| 日本高清一区| 日韩av新片网| 日韩精品一级二级| 亚洲毛片在线观看| 欧美色视频一区二区三区在线观看| 蜜桃精品视频在线| 在线观看国产精品日韩av| 国产一区二区丝袜| 高清国产mv在线观看| 一区二区三区欧美视频| 亚洲一区二区三区香蕉| 亚洲高清在线免费观看| 久久综合九色综合97_久久久| 中文字幕在线播放不卡| 国产精品乱人伦| 亚洲精品国产电影| 亚洲一区制服诱惑| 成人午夜伦理影院| 天天爽天天狠久久久| 日韩在线观看视频免费| 亚洲男人天堂久久| 自拍视频第一页| eeuss国产一区二区三区| 欧美国产日本高清在线 | 亚洲乱码av中文一区二区| 四虎精品欧美一区二区免费| 一级片久久久久| 操人视频在线观看欧美| 国产一级不卡视频| 日韩电影一区二区三区| 日本精品www| 老司机免费视频| 亚洲女同女同女同女同女同69| 亚洲综合激情另类小说区| 强伦人妻一区二区三区| 精品久久久久人成| 国内偷拍精品视频| 久久久久国产精品人| 欧美大成色www永久网站婷| 一起操在线视频| 亚洲成年网站在线观看| 久久久亚洲国产| 国产精品久久久精品四季影院| 欧美自拍大量在线观看| 欧美爱爱小视频| 国产精品美女免费视频| 日韩乱码在线观看| 亚洲同性gay激情无套| 国产精品免费精品一区| 91看片破解版| 欧美日韩国产欧美日美国产精品| 成人免费视频国产在线观看| 国产欧美熟妇另类久久久| 亚洲综合社区网| 成人毛片老司机大片| 日韩手机在线观看视频| 色多多国产成人永久免费网站| 天天干在线观看| www.亚洲一区| 在线天堂中文字幕| 欧美日韩三级在线| 99久久免费国产| 国产福利在线观看视频| 成人激情视频在线观看| 理论片中文字幕| 久久精品国产亚洲7777| 国产又粗又黄又爽| 国产精品入口夜色视频大尺度| 日韩中文字幕在线播放| 亚洲人成在线观看| 久久综合影视| 亚洲欧美精品一区二区三区| 免费的av在线| 欧美精品一区视频| 国产精品乱码一区二区| 日韩一区二区久久久| 麻豆国产91在线播放| 国产九色精品| 中文字幕 人妻熟女| 欧美日韩精品久久久免费观看| 日本精品久久久久| 91色婷婷久久久久合中文| 麻豆成人在线看| 亚洲第一精品在线观看| 日韩大片免费观看视频播放| 国产欧美精品aaaaaa片| 96av麻豆蜜桃一区二区| 成人夜晚看av| 蜜桃免费网站一区二区三区| 国产精品视频福利| 国产亚洲精品免费| 麻豆亚洲一区| 日韩电影在线看| 黄色av网址在线播放| 亚洲免费电影在线| 人人人妻人人澡人人爽欧美一区| 色婷婷av一区二区三区软件| 久久精品国产精品亚洲| 少妇无码一区二区三区| 欧美日韩综合精品| 性感美女极品91精品| 国产3级在线观看| 在线观看国产日韩| av大片在线免费观看| 91原创国产| 亚洲色图欧洲色图| 国产毛片毛片毛片毛片毛片毛片| 中文字幕不卡av| 久久精品国产99国产精品| 亚洲精品久久久久久久久久久久久| 精品肉丝脚一区二区三区| 日韩黄在线观看| 蜜臀av性久久久久蜜臀aⅴ流畅| 国产一线二线三线女| 精品久久人人做人人爰| 男女男精品视频网站| 国产日韩av在线| 亚洲超碰精品一区二区| 99re国产在线| 国产精品视频网| 夜夜揉揉日日人人青青一国产精品| 欧美一区观看| 国产亚洲精品一区二555| 亚洲精品视频在线观看免费视频| 日韩欧美激情四射| 喷白浆一区二区| 天天想你在线观看完整版电影免费| 日韩精品一区二区三区蜜臀| 久久精品二区亚洲w码| 亚洲国产第一区| 久中文字幕一区| 国产手机视频精品| 国产一区二区三区久久久 | 婷婷综合在线观看| 精品国产九九九| 一级淫片在线观看| 999国内精品视频在线| 欧美日韩国产在线观看| 国产麻豆成人传媒免费观看| 日韩福利二区| 欧美极品少妇xxxxⅹ喷水| 国产亚洲欧美日韩日本| 无码人妻丰满熟妇精品| 久草在在线视频| 日韩视频123| 日韩中文字幕在线观看视频| 一区一区视频| 欧美午夜精品理论片a级按摩| 在线看的片片片免费| 日本免费久久高清视频| 美女网站色91| 超碰手机在线观看| 青青草原av在线播放| 久久国产一区二区| 亚洲电影激情视频网站| 狠狠人妻久久久久久综合蜜桃| 亚洲人av在线影院| 国产亚洲综合色| 狂野欧美一区| 国产黄在线免费观看| 91女神在线观看| 91精品国产91| 精品免费99久久| 欧美日韩亚洲视频| 中文字幕精品视频在线观看| 波多野结衣视频播放| 中文字幕乱码一区二区三区 | 欧美二区在线视频| 91九色视频在线观看| 日韩av网站电影| 欧美精品日韩综合在线| 国产福利资源在线| 国产一区二区在线免费播放| 欧美精品在线视频观看| 亚洲欧美精品一区| 91黄色免费看| 在线区一区二视频| 欧美日韩人人澡狠狠躁视频| 亚洲日穴在线视频| 国产精品你懂的在线| 91免费版在线看| 91在线看国产| 久久综合色8888| 国产亚洲精久久久久久| 久久综合九色综合欧美98| 国产精品伊人色| 石原莉奈在线亚洲二区| 国产视频一二三四区| 中文字幕av久久爽| 中文字幕激情视频| 中文字幕人妻互换av久久| 精品不卡一区二区| 糖心vlog精品一区二区| 日产精品久久久| 91麻豆视频在线观看| 国产视频www| 亚洲 小说区 图片区 都市| 亚洲美女福利视频| 日韩精品一二三区| 国产裸体无遮挡| 亚洲图片中文字幕| 美女久久久久久久久久| 日本天堂在线播放| 午夜免费福利小电影| 精选一区二区三区四区五区| 亚洲国产精品人久久电影| 欧美日韩在线播放三区| 亚洲电影免费观看高清完整版在线| 欧美精品一区二区三区很污很色的| 欧美精品视频www在线观看| 亚洲男人第一av网站| 国产亚洲人成网站在线观看| 久久成人这里只有精品| 国产女人精品视频| 欧美大陆一区二区| 国产精品50p| 精品国产人妻一区二区三区| 欧美肥妇bbwbbw| 黄色一级大片在线免费看国产一| 丁香激情综合五月| 亚洲国产成人自拍| 懂色一区二区三区免费观看| 亚洲国产成人精品一区二区三区| 久久久久无码国产精品不卡| 一级黄色片在线看| 麻豆精品视频在线| 亚洲国产日产av| 久久久国产精彩视频美女艺术照福利| 亚洲精品免费在线视频| 国产又黄又大又粗视频| www.xxx麻豆| 最新一区二区三区| 美女尤物国产一区| 日本高清成人免费播放| 久久久久久美女| 国产成人一二三区| 中文字幕在线观看网址| 人人妻人人澡人人爽久久av| 99精品1区2区| 国产视频精品在线| 91黄在线观看| 亚洲av人人澡人人爽人人夜夜| 中文字幕资源网| 18涩涩午夜精品.www| 伊人性伊人情综合网| 久久久国产精品视频| 国产一二三四五| 亚洲最大天堂网| 国内毛片毛片毛片毛片| 最近国语视频在线观看免费播放| 久久综合亚州| 日韩欧美国产午夜精品| 99re在线观看视频| 俄罗斯毛片基地| 成人免费va视频| 国产亚洲精品久久久优势| 精品日本一区二区三区| 99成人在线观看| 99精品在线观看视频| 在线观看91久久久久久| 99热这里只有精品免费| 在线免费看毛片| 制服丝袜亚洲播放| 久久av一区二区三区漫画| 国产精品久久久免费观看| 成人午夜免费视频| 久久久久久久国产| 国产婷婷在线观看| 国产乱对白刺激视频不卡| 亚洲乱亚洲乱妇无码| 污视频在线免费观看一区二区三区| 午夜免费激情视频| 亚洲欧美另类小说视频| 国产精品96久久久久久| 天天色综合社区| www.97av| 精品国产一区二区三区av性色| 青草网在线观看| 天堂影院一区二区| 日韩午夜在线影院| 黄色一级片av| 天天综合网在线| 欧美猛男性生活免费| 丰满圆润老女人hd| 国产高潮在线观看| 国产一区二区激情| 美女露出粉嫩尿囗让男人桶| 国产一区二区毛片| 成人黄色av网站| 久久人妻免费视频| 日本精品一区二区三区四区的功能| 亚洲一区不卡在线| 午夜一区在线观看| 欧美国产日韩一区二区在线观看| 五月婷六月丁香| 一本大道久久精品懂色aⅴ| 无码人妻精品一区二区蜜桃百度| 一级黄色免费片| 久久久久久久久久久亚洲| 日韩av电影网址| 欧美嫩在线观看| 色一情一区二区三区| 亚洲精品自拍动漫在线| 国产欧美日韩综合一区在线观看| 女女互磨互喷水高潮les呻吟| 欧美国产精品中文字幕| 亚洲国产激情一区二区三区| 伊人手机在线视频| 亚洲第一偷拍网| 国产极品美女高潮无套嗷嗷叫酒店| 精品久久久久久久久久久久久| 久久久久久久少妇| 亚洲制服丝袜一区| 男人草女人视频| 一区二区三区日韩在线观看| 成年丰满熟妇午夜免费视频| 精品亚洲porn| 久久久女人电视剧免费播放下载| 天堂网中文字幕| 国产91在线播放| 亚洲一线在线观看| 高清视频在线观看一区| 天堂网中文字幕| 性欧美亚洲xxxx乳在线观看| 国产jjizz一区二区三区视频| 亚洲精品按摩视频| 中文字幕人妻一区二区| 精品视频久久久| 动漫精品一区一码二码三码四码| 亚洲精品视频免费| 中文字幕乱码无码人妻系列蜜桃| 国产日韩欧美中文在线播放| 亚洲天堂网在线视频| 精品中文字幕人| 亚洲一区在线观看免费观看电影高清| 欧美日韩亚洲一区二区三区在线观看| 久久久精品天堂| 校园春色 亚洲色图| 日韩成人激情视频| 亚洲av少妇一区二区在线观看| 成人久久久久久|