技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥工程技術(shù)，涉及一種腫瘤干細(xì)胞疫苗及其制備和應(yīng)用。

背景技術(shù)

惡性腫瘤是一種全身性的慢性疾病。在中晚期患者體內(nèi)，不僅臟器中有影像學(xué)檢查時(shí)明顯的團(tuán)塊腫瘤，在外周血中更有大量看不見的循環(huán)腫瘤細(xì)胞和腫瘤干細(xì)胞(Cancer?stem?cell,CSC)，隨時(shí)準(zhǔn)備定居在機(jī)體易感部位，發(fā)育成新的轉(zhuǎn)移灶，這也是腫瘤無法根治的原因。傳統(tǒng)的腫瘤治療包括4種主要療法，即手術(shù)、化療、放療和免疫治療。通常前三種療法治療3-5年后，腫瘤都會(huì)發(fā)生周邊臟器或遠(yuǎn)端臟器的轉(zhuǎn)移。隨著對(duì)CSC研究的深入，人們已經(jīng)明確復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的原因不是手術(shù)做得不徹底，而是由于缺乏有效的控制、甚至消滅CSC的方法。

CSC來自人類自體干細(xì)胞的惡變，具有低分化度和高擴(kuò)增性等特點(diǎn)。這些干細(xì)胞可抵抗幾乎全部的傳統(tǒng)化療藥物及放療，可在傳統(tǒng)治療的同時(shí)即引起腫瘤卵巢復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。這種現(xiàn)象對(duì)于很多免疫治療也不例外，原因是過去一直使用成熟腫瘤細(xì)胞作為抗原供免疫細(xì)胞識(shí)別，而CSC不表達(dá)這些抗原，可逃避免疫攻擊。所以，腫瘤的免疫治療急需更新觀念，將治療的主攻方向從成熟腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)镃SC。

目前國際公認(rèn)的成熟的尋找CSC的方法是利用ALDEFLUOR/ALDH在人類腫瘤中尋找。ALDH是所有干細(xì)胞中共有的一種酶，在腫瘤干細(xì)胞中高或強(qiáng)表達(dá)，而在普通干細(xì)胞中弱或無表達(dá)。

目前，為了獲得腫瘤干細(xì)胞(CSC)，人們常通過大量培養(yǎng)普通的腫瘤細(xì)胞系，由單瓶消化擴(kuò)增至多瓶，再提取出其內(nèi)的腫瘤干細(xì)胞。采用這種方法，其存在很多弊端：獲取的腫瘤干細(xì)胞數(shù)量有限，普通腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)花費(fèi)的人力與財(cái)力頗大，長(zhǎng)期大量培養(yǎng)各種腫瘤細(xì)胞會(huì)需要很多培養(yǎng)試劑、配置專人、容易污染致死，甚至出錯(cuò)；腫瘤干細(xì)胞培養(yǎng)存活率低；培養(yǎng)普通腫瘤細(xì)胞因培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)箱空間有限，獲得的細(xì)胞數(shù)量也就不多，從中再抽取腫瘤干細(xì)胞，得到的腫瘤干細(xì)胞量就更少，遠(yuǎn)無法滿足需求。因此，開發(fā)一種操作簡(jiǎn)單、快捷的有助于獲取高產(chǎn)量的腫瘤干細(xì)胞(CSC)的制備方法也是非常有必要的。

近年來，已經(jīng)有關(guān)于腫瘤干細(xì)胞疫苗具有抗腫瘤療效的報(bào)道，理論上滅活的腫瘤干細(xì)胞可被直接作為疫苗，但是臨床上的療效很不理想，因此有必要研究和開發(fā)適合于臨床應(yīng)用的腫瘤干細(xì)胞疫苗。

卵巢惡性腫瘤(卵巢癌)在女性常見惡性腫瘤中占2.4％～6.5％，在女性生殖系統(tǒng)癌瘤中占第3位，次于宮頸癌和宮體癌。但因卵巢癌致死者，卻占各類婦科腫瘤的首位，對(duì)婦女生命造成嚴(yán)重威脅。卵巢癌的病因尚不清楚，其發(fā)病可能與年齡、生育、血型、精神因素及環(huán)境等有關(guān)。近幾年來，由于對(duì)宮頸癌及宮體癌的防治，取得了一定的成效，而有關(guān)卵巢癌的防治方面收效相對(duì)較小。所以在婦女生殖系統(tǒng)癌瘤中，卵巢癌是造成死亡原因最高的一種腫瘤。北京市8個(gè)醫(yī)院的材料中，卵巢惡性腫瘤占女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤的22.9％。卵巢惡性腫瘤中，不論是國內(nèi)或國外的資料，均以上皮性癌最為多見。中國惡性生殖細(xì)胞腫瘤的發(fā)病率，據(jù)幾位作者的報(bào)道，均比國外發(fā)病率高。卵巢癌具有侵襲性和難治愈的特點(diǎn),治療后仍有可能復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移。而其起源、復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移的真正原因可能是存在于卵巢癌內(nèi)極少數(shù)具有干細(xì)胞的自我更新能力和多向分化潛能的細(xì)胞群，即卵巢癌干細(xì)胞，這些細(xì)胞具有化療、放療及缺氧抵抗性，同時(shí)具有高致瘤性、高侵襲轉(zhuǎn)移性，在卵巢癌的發(fā)生﹑發(fā)展乃至轉(zhuǎn)移﹑復(fù)發(fā)中起著極其重要作用。然而，放療和化療對(duì)存在于腫瘤中數(shù)量較少的干細(xì)胞樣細(xì)胞群療效甚微，經(jīng)過治療后殘存的卵巢癌干細(xì)胞的增殖足以促使卵巢癌復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移之一。目前尚缺乏有效的卵巢癌干細(xì)胞疫苗，本領(lǐng)域技術(shù)人員在這方面亟待取得突破。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的第一個(gè)方面是提供一種卵巢癌干細(xì)胞疫苗，對(duì)卵巢癌患者具有積極地治療效果，可增強(qiáng)患者的免疫功能。

本發(fā)明所述的卵巢癌干細(xì)胞疫苗包括：按體積比為3:1:1混合的滅活的卵巢癌干細(xì)胞、甘露聚糖肽和脂肪乳。

本發(fā)明的第二個(gè)方面提供一種卵巢癌干細(xì)胞疫苗的制備方法，可實(shí)現(xiàn)簡(jiǎn)單、快捷地獲取高產(chǎn)量、易于質(zhì)量控制的卵巢癌干細(xì)胞，并制備出臨床上有效的卵巢癌干細(xì)胞疫苗。

本發(fā)明所述的卵巢癌干細(xì)胞疫苗的制備方法，包括以下步驟：獲得卵巢癌干細(xì)胞；將所述卵巢癌干細(xì)胞滅活；將滅活的卵巢癌干細(xì)胞凍融在生理鹽水里，與佐劑甘露聚糖肽、脂肪乳混勻，從而獲得所述的卵巢癌干細(xì)胞疫苗。

根據(jù)本發(fā)明所述的卵巢癌干細(xì)胞疫苗的制備方法的進(jìn)一步特征，所述滅活包括：將卵巢癌干細(xì)胞由-80℃至20℃反復(fù)凍融五次致死。