[發明專利]卵巢癌干細胞疫苗及其制備方法與應用有效
| 申請號: | 201410502795.6 | 申請日: | 2014-09-26 |
| 公開(公告)號: | CN104258381A | 公開(公告)日: | 2015-01-07 |
| 發明(設計)人: | 陳繼冰;林茂;左建生;劉建國;徐克成;牛立志 | 申請(專利權)人: | 廣州復大醫療股份有限公司復大腫瘤醫院 |
| 主分類號: | A61K39/00 | 分類號: | A61K39/00;A61K39/39;C12N5/095;A61P15/08;A61P35/00 |
| 代理公司: | 廣州三環專利代理有限公司 44202 | 代理人: | 劉宇峰 |
| 地址: | 510665 廣*** | 國省代碼: | 廣東;44 |
| 權利要求書: | 查看更多 | 說明書: | 查看更多 |
| 摘要: | |||
| 搜索關鍵詞: | 卵巢癌 干細胞 疫苗 及其 制備 方法 應用 | ||
1.一種卵巢癌干細胞疫苗,其特征在于,包括:按體積比為3:1:1混合的滅活的卵巢癌干細胞、甘露聚糖肽和脂肪乳。
2.一種卵巢癌干細胞疫苗的制備方法,其特征在于,包括以下步驟:
獲得卵巢癌干細胞;
將所述卵巢癌干細胞滅活;以及
將滅活的卵巢癌干細胞凍融在生理鹽水里,與佐劑甘露聚糖肽、脂肪乳混勻,從而獲得所述的卵巢癌干細胞疫苗。
3.根據權利要求2所述的卵巢癌干細胞疫苗的制備方法,其特征在于,所述滅活包括:將卵巢癌干細胞由-80℃至20℃反復凍融五次致死。
4.根據權利要求2所述的卵巢癌干細胞疫苗的制備方法,其特征在于:所述卵巢癌干細胞、甘露聚糖肽和脂肪乳的混合比例為3:1:1(體積比)。
5.根據權利要求2所述的卵巢癌干細胞疫苗的制備方法,其特征在于:所述的卵巢癌干細胞是CD133陽性卵巢癌干細胞。
6.根據權利要求5所述的卵巢癌干細胞疫苗的制備方法,其特征在于,所述的CD133陽性卵巢癌干細胞是通過以下步驟制備的:
A.將液氮或-80℃保存的卵巢癌細胞于37℃水浴,快速溶化;
B.用8.0ml的含10%FBS的RPMI1640培養基混勻已融化的卵巢癌細胞懸液,于1500轉/分,離心8分鐘;
C.棄上清,再吸取8.0ml培養基質混勻細胞沉淀,再1500轉/分,離心8分鐘,棄上清,細胞沉淀用1.0ml培養基混勻,備用;
D.另取一個75cm2方瓶,加入14.0ml培養基質,將1.0ml上述制備的含卵巢癌細胞懸液加入此方瓶中,于37℃,5%CO2孵育箱中培養;
E.卵巢癌細胞呈貼壁生長,經過3-4天,卵巢癌細胞生長至80%-95%單層時,棄上清,用0.5mM的EDTA,處理卵巢癌細胞大約3-5分鐘,用倒置顯微鏡觀察,當90%的卵巢癌細胞變圓時,即可用彎管吹打并將消化的細胞轉移到15ml離心管中,于1500轉/分下,離心8分鐘,棄上清,計數,若細胞數不足,擴增至三個培養瓶,繼續消化離心;
F.加入緩沖液重懸細胞,采用CD133免疫磁珠分選系統從細胞液中分選出CD133陽性卵巢癌干細胞;
G.將前一步驟獲得的CD133陽性卵巢癌干細胞在DMEM/F12培養液中進行培養;
H.37℃、5%CO2孵育箱中培養5-7天,從而獲得足夠用于制備卵巢癌干細胞疫苗的CD133陽性卵巢癌干細胞。
7.根據權利要求6所述的卵巢癌干細胞疫苗的制備方法,其特征在于,所述步驟E中,在加入EDTA的同時加入0.25%胰酶1.0ml以消化腫瘤細胞。
8.根據權利要求6所述的卵巢癌干細胞疫苗的制備方法,其特征在于,所述步驟G中,在DMEM/F12培養液中添加:生長因子rhEGF?15~25ng/ml、rhbFGF?5~15ng/ml、硫酸卵巢素2~6ug/ml、胎牛血清0.1~0.2%(質量百分比)和青霉素-鏈霉素雙抗0.5~1.5%(質量百分比)。
9.根據權利要求6所述的卵巢癌干細胞疫苗的制備方法,其特征在于,所述步驟H中,所述足夠用于制備卵巢癌干細胞疫苗的CD133陽性卵巢癌干細胞是培養至細胞個數達到1×105~5×105/ml的CD133陽性卵巢癌干細胞。
10.根據權利要求2至9之一所述的制備方法獲得的卵巢癌干細胞疫苗用于制備治療卵巢癌的藥物中的用途。
該專利技術資料僅供研究查看技術是否侵權等信息,商用須獲得專利權人授權。該專利全部權利屬于廣州復大醫療股份有限公司復大腫瘤醫院,未經廣州復大醫療股份有限公司復大腫瘤醫院許可,擅自商用是侵權行為。如果您想購買此專利、獲得商業授權和技術合作,請聯系【客服】
本文鏈接:http://www.17sss.com.cn/pat/books/201410502795.6/1.html,轉載請聲明來源鉆瓜專利網。





